[发明专利]黄芪提取物中糖类成分的含量测定方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种中药提取物中有效成分的含量测定方法，特别涉及黄芪提取物中糖类成分的含量测定方法，该提取物为芪参益气滴丸中间体之一。

背景技术：

中药材黄芪为豆科草本植物蒙古黄芪、膜荚黄芪的根，具有补气固表、利水退肿、托毒排脓、生肌等功效。黄芪的药用迄今已有2000多年的历史，现代研究，黄芪含皂甙、蔗糖、多糖、多种氨基酸、叶酸及硒、锌、铜等多种微量元素。有增强机体免疫功能、保肝、利尿、抗衰老、抗应激、降压和较广泛的抗菌作用。

黄芪提取物(黄芪提取物)：黄芪提取物为黄芪经过乙醇提取得到的黄芪提取物，其在市场上有售，黄芪提取物可以作为如芪参益气滴丸的制剂的中间体。芪参益气滴丸是天士力集团研制的治疗心血管疾病的现代中药，是提取黄芪、丹参、三七、降香中的有效成分精制而成的滴丸制剂，适用于慢性心功能不全、心肌炎及后遗症、心肌梗塞恢复期、心肌纤维化等病症。芪参益气滴丸在上市七年中，已经建立起了一整套全面地的工艺质量控制体系，并且不断进行完善和补充。

黄芪提取物中含有的主要活性成分为：polysaccharides黄芪多糖，另有其他成分如：单糖、多糖、皂甙、黄酮、氨基酸、微量元素、蛋白质、核黄素、叶酸、维生素P、有机酸、香豆素、β-谷甾醇、胡萝卜甙、羽扁豆醇、正十六醇、胆碱、甜菜碱等多种成分。

中药中的糖类成分：糖类成分可分布于植物的各个部位，常常占植物干重的80％～90％，是中药材及中药产品中的主要组成成分，所占含量比例很高。另外，许多糖类成分对于中药活性成分具有辅助药效作用，同时糖类成分本身也具有为机体提供能量的作用，因此糖类成分的测定对于全面掌握中药材及中药产品质量非常重要。测定结果表明，黄芪提取物中主要含有蔗糖和果糖等小分子糖类物质，且含量较高，所以测定它们的含量非常必要。

糖类成分的测定：针对糖类成分的常用测定方法有化学分析法、气相色谱法、离子交换色谱法、凝胶色谱法、高效液相色谱法、毛细管电泳法、衍生化气相色谱法等。但这些方法稳定性差，灵敏度不高。

为得到一种新的黄芪提取物中糖类成分的含量测定方法，本发明采用高效液相色谱蒸发光散射检测器(HPLC-EL SD)法，具有稳定性好、灵敏度高、能够进行梯度洗脱等优点。

本发明采用PrevailTM Carbohydrate ES色谱柱，对于各个小分子糖类的分离度大大提高。相对于常用的氨基柱，具有噪音低，色谱柱寿命长的特点，是本专利的最大优势所在。

本发明以最简单的乙腈-水为流动相，能够在20分钟内完成测定，色谱峰分离度均大于3，达到高效、快速分离。

本发明采用固相萃取技术，能够有效去除黄酮、皂苷等干扰成分。

经验证本发明的质量控制方法精密度、灵敏度、稳定性良好，能够有效测定复方丹参浸膏中的糖类物质含量。

本发明针对黄芪提取物中含量较高的糖类成分建立的含量测定方法，目的是进一步提升产品质量控制水平，从而更加准确的把握产品质量。

发明内容：

本发明的目的是提供一种专属性强、灵敏度高、稳定准确的糖类成分测定方法，用于黄芪提取物中糖类成分的含量测定，该方法包括以下步骤：

1)糖类成分对照品溶液的制备

2)对黄芪提取物进行溶解，上固相萃取小柱，水洗脱，收集洗脱液；

3)采用高效液相色谱法进行样品测定。采用PrevailTM Carbohydrate ES色谱柱，以一定比例的有机溶剂和水为流动相，进行洗脱；

4)以ELSD检测器进行检测；

5)用外标两点法对数方程分别计算果糖和蔗糖的含量。

其中所述糖类成分为果糖和蔗糖。其中所述黄芪提取物为黄芪经过水煮得到的浸膏，或黄芪经过有机溶剂提取得到的浸膏。所述有机溶剂为醇类有机溶剂，醇类有机溶剂，优选乙醇，优选95％的食用乙醇。

本发明所述黄芪提取物还可以是经过水煮醇提得到的，也可以是经过醇提水沉得到的，还可以是在以上步骤的基础上进一步经过选自萃取，过柱，酸化，碱化等步骤得到的。

如采用以下方法得到黄芪提取物，提取方法包括以下步骤：黄芪药材加水煎煮3次，每次1.5h，第1次加水量为5倍量，第2、3次加水量为3倍量，合并煎煮液，浓缩至浸膏，加95％乙醇至溶液含醇量为70％，冷藏过夜，过滤，滤液浓缩至浸膏。加无水乙醇使浸膏含醇量为85％，冷藏过夜，滤过，滤液浓缩至浸膏，即可。

优选的本发明的测定方法如下：