[发明专利]检测四环素类药物的磁颗粒化学发光试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种化学发光试剂盒及其测试方法，特别是检测水产、组织、牛奶、鸡蛋、肾脏、肝脏、蜂王浆等样本中四环素类药物残留量的磁颗粒化学发光检测试剂盒。 

技术背景

四环素类药物(Tetracyclines，TCs)是由链霉菌产生的一类广谱抗生素，在化学结构上都属于多环并四苯羧基酰胺母核的衍生物。在畜禽生产中，四环素类药物被广泛作为药物添加剂，用于防治肠道感染、促生长和提高奶牛产奶量。同时也被广泛应用于水产养殖和养蜂中预防和治疗多种感染性疾病。 

但是由于四环素类药物主要以原型经肾小球过滤排出，残留药物能沉积于骨及牙组织内，与新形成的骨、牙所沉积的钙相结合，导致牙齿持久成黄色，俗称“四环素牙”，使出生的幼儿乳牙釉质发育不全并出现黄色沉积，引起畸形或生长抑制。四环素类药物还在肝组织中富集，造成肝损害，还可造成过敏反应、二重感染、致畸胎影响。同时四环素药物残留易诱导耐药菌株。因此四环素类药物造成的食品残留给人们身体健康带来极大地隐患。 

在四环素类药物的检测方面，目前最常用的方法包括高效液相色谱法(HPLC)、液相色谱-质谱联用(LC-MS)、酶联免疫吸附法(ELISA)等方法。仪器方法操作繁琐、耗时长、检测费用昂贵，对检测人员专业要求较高，样本前处理方法复杂，仪器本身的价格也比较昂贵，不利于推广应用，酶联免疫吸附法是基于抗原-抗体的特异性反应，检测灵敏度高，特异性较好，技术操作简单，对食品安全快速检测技术的发展起到了积极的促进作用，但是ELISA方法存在一些缺陷，如非均相反应，需要多步洗板过程，难以提高操作的自动化程度，酶催化反应，对温度的要求较高，试剂盒的稳定性较差。 

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种四环素类药物检测试剂盒，采用该试剂盒进行四环素类药物的检测时不仅具备较高的灵敏度，特异性，而且具有较高的反应速度。 

本发明的另一个目的在于提供一种四环素的测试方法，该方法操作简单，灵敏度高，特异性好。 

实现上述目的，本发明提供一种四环素类药物检测试剂盒，其包含的主要试剂有：发光标记物、荧光素标记物、标准品、质控品、分离试剂。 

所述的分离试剂是包被有羊抗FITC抗体的顺磁性纳米微珠。 

所述的顺磁性纳米微珠，表面含有-OH、-COOH或-NH₂活性基团的微珠，用于包被羊抗FITC单克隆抗体，其内芯是Fe₃O₄或γ-Fe₂O₃，使得微珠具有顺磁性。 

所述的发光标记物是异鲁米诺衍生物标记的四环素半抗原。所述的异鲁米诺衍生物是ABEI、AHEI或ABEN。 

所述的试剂盒还包括标准品，质控品和浓缩洗液。 

所述的荧光素标记物是FITC标记四环素类药物单克隆抗体。 

本发明还提供一种利用试剂盒检测四环素类药物的方法，包括下列步骤： 

1)分别吸取20μl-100μl标准品或样本，然后加入20μl-100μl发光标记物，再加20μl-100μl荧光素标记物，充分混匀后，37℃温育15min； 

2)加入包被有羊抗FITC单克隆抗体的顺磁性纳米微珠80-150μl，混匀后在37℃温育5min； 

3)用磁分离架分离5min，弃上清后用清洗液300-500μl冲洗复合物沉淀； 

4)上述清洗步骤重复2-4次； 

5)4)所得分离好的复合物直接放入测量暗箱，加入激发底物1和激发底物2，延迟3-5s后检测发出的相对光强度(RLU)，样本中的含量与RLU成一定比例关系，可以通过RLU集合标准曲线法计算四环素类药物的浓度。 

所述的发光底物的主要成分是NaOH和H₂O₂。 

本发明中分析测试方法所用的分析仪是：包括电源电路、自动注射泵1和2、测量室、发光室、光电倍增管计数器和输出系统，同时还配置有计算机与中文 界面的Windows控制软件，可进行资料录入、结果汇总、质量控制、结果储存和结果查询等功能，可完成多种分析模式的编程，定量或定性报告结果，自动生成并储存、更新功能，两点自动修正标准曲线，所采用的系统是CI-2008系统。