[发明专利]检测安定的磁颗粒化学发光试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种化学发光检测试剂盒及其测试方法。特别是检测动物源性食品中安定的磁颗粒化学发光检测试剂盒。

背景技术

安定(Diazepam)作为一种镇静剂在畜禽中的应用日益广泛，可以减少畜禽动物的运动量，增加动物的体重并可保证畜禽在长途运输中不会产生应激反应。但动物大量摄取安定会导致药物残留于食品而被人体吸收，大剂量可产生中枢神经抑制，呼吸抑制等中毒表现。长期服用该类药物可产生依赖性或成瘾性，突然停药可产生停药反应，表现为抑郁、精神激动、失眠等。

目前，用于安定残留检测的方法主要是高效液相色谱分析法(HPLC)和酶联免疫法(ELISA)。高效液相色谱法操作繁琐，检测费用昂贵，对检测人员要求高，耗时长，不利于推广应用。酶联免疫吸附法检测需多步洗板步骤，相对耗时较长，难以提高操作自动化程度，，酶催化反应，对温度的要求较高，试剂盒的稳定性较差。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种检测安定的磁颗粒化学发光试剂盒，采用该试剂盒进行安定残留的检测时不仅具备较高的灵敏度，特异性，而且具有较高的反应速度。

本发明的另一个目的在于提供一种安定残留的测试方法，该方法操作简单，灵敏度高，特异性好。

实现上述目的，本发明提供一种安定残留检测试剂盒，其包含的主要试剂有：发光标记物、荧光素标记物、标准品、质控品、分离试剂。

所述的分离试剂是包被有羊抗FITC抗体的顺磁性纳米微珠。

所述的顺磁性纳米微珠，表面含有-OH、-COOH或-NH₂活性基团的微珠，用于包被羊抗FITC单克隆抗体，其内芯是Fe₃O₄或γ-Fe₂O₃，使得微珠具有顺磁性。

所述的发光标记物是异鲁米诺衍生物标记的安定残留半抗原。所述的异鲁米诺衍生物是ABEI、AHEI或ABEN。

所述的试剂盒还包括标准品，质控品和浓缩洗液。

所述的荧光素标记物是FITC标记安定残留单克隆抗体。

本发明还提供一种利用试剂盒检测安定残留的方法，包括下列步骤：

1)分别吸取20μl-100μl标准品或样本，然后加入20μl-100μl发光标记物，再加20μl-100μl荧光素标记物，充分混匀后，37℃温育15min；

2)加入包被有羊抗FITC单克隆抗体的顺磁性纳米微珠80-150μl，混匀后在37℃温育5min；

3)用磁分离架分离5min，弃上清后用清洗液300-500μl冲洗复合物沉淀；

4)上述清洗步骤重复2-4次；

5)4)所得分离好的复合物直接放入测量暗箱，加入激发底物1和激发底物2，延迟3-5s后检测发出的相对光强度(RLU)，样本中的含量与RLU成一定比例关系，可以通过RLU集合标准曲线法计算安定残留的浓度。

所述的发光底物的主要成分是NaOH和H₂O₂。

本发明中分析测试方法所用的分析仪是：包括电源电路、自动注射泵1和2、测量室、发光室、光电倍增管计数器和输出系统，同时还配置有计算机与中文界面的Windows控制软件，可进行资料录入、结果汇总、质量控制、结果储存和结果查询等功能，可完成多种分析模式的编程，定量或定性报告结果，自动生成并储存、更新功能，两点自动修正标准曲线，所采用的系统是CI-2008系统。

本发明所述的分离试剂是包被羊抗FITC单克隆抗体，其表面基团的含量是0.1-0.3eqm/g，其保存于3-5％卵清蛋白，0.1-0.2％Tween-20，0.2％NaN₃，pH7.2-7.6的PBS缓冲液中。所述的FITC是异硫氰酸荧光素。所述百分含量为质量百分含量。

所述的发光标记物是异鲁米诺衍生物ABEI、AHEI或ABEN标记的安定半抗原，其保存于含pH7.2-7.6，0.1-0.3％Tween-20，0.1％NaN₃的PBS缓冲液中。所述百分含量是质量百分含量。

所述的荧光素标记物是FITC标记的安定单克隆抗体，其保存于pH7.2-7.6，含3-5％卵清蛋白，0.2％NaN₃的PBS缓冲液。所述百分含量为质量百分含量。