[发明专利]一种苯乙醇胺A快速检测卡及其检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种苯乙醇胺A快速检测卡及其检测方法，是一种检测苯乙醇胺A的检测器具，属于苯乙醇胺A检测技术领域。

背景技术

现代畜牧业为人们提供了极其丰富的各种食品，但同时畜牧业中存在大量使用养殖添加剂的现象，特别是在家畜饲料中使用β肾上腺受体激动剂，如盐酸克伦特罗（瘦肉精）、莱克多巴胺等，这类添加剂具有促进脂肪分解和增加肌肉生长的作用可以提高瘦肉率，人食用了用这类添加剂饲养的畜产品后，会出现中毒症状。因此，我国已明文规定严禁使用。苯乙醇胺A是2011年最新发现添加在饲料中的β-受体兴奋剂，又名克伦巴胺，分子式为C₁₉H₂₄N₂O₄，化学结构式为2-[4-（4-硝基苯基）丁基-2-羟基氨基]-1-甲氧基苯乙醇，是福莫特罗的同分异构体，其是美国礼来公司合成莱克多巴胺的副产物，具有同盐酸克伦特罗和莱克多巴胺相同的作用和效果。

目前，研究组织或饲料中苯乙醇胺A检测方法方面的资料较少，主要是运用高效液相色谱法及液质联用等进行定性和定量的分析。这些方法对实验仪器设备要求高，操作繁琐，对操作人员的专业知识要求高，费时费力。因此建立一种准确可靠又快速方便的检测食品中苯乙醇胺A的检测方法是非常必要的。

本发明拟发明一种基于小分子物质苯乙醇胺A偶联蛋白质后而具有抗原性的免疫学检测方法，采取免疫学竞争法的原理，结合胶体金或乳胶颗粒标记技术和免疫层析法设计的一种快速检测试剂，可快速特异地检测饲料或组织等样品中的苯乙醇胺A。根据检测卡样品检测线(T)和质控线(C)的有无显色来判定样品中的苯乙醇胺A含量。反应是利用苯乙醇胺A蛋白质偶联物抗原性而建立的一种检测方法，具有特异性强的优点，可避免其它检测方法的假阳性导致的误检问题。同时检测卡操作简单快速，无需特殊的仪器设备，适合现场操作。由于样本量需要少、简便快速，适用于大量样本的筛查，结果准确，灵敏度高，准确率大。

发明内容

本发明的目的在于提供一种能检测苯乙醇胺A的检测器具，直接应用免疫学的方法检测饲料或组织，如肌肉、肝脏或肾脏等样品中苯乙醇胺A的含量，克服现有色谱法检测的操作繁琐等缺点，建立基于免疫学特异性的检测方法。

本发明的技术方案：一种苯乙醇胺A快速检测卡，其为在长条扁平薄壳状的检测卡外壳1中设置测试条2，检测卡外壳表面有检测窗孔3和加样孔4；测试条2是由支承背板5上通过不干胶在其上依次粘贴样品垫8、胶体金膜或乳胶颗粒膜7、硝酸纤维素膜6、和吸水膜9所组成；支承背板中部叠置粘贴硝酸纤维素膜6，支承背板一端叠置粘贴吸水膜9，另一端叠置粘贴样品垫8，吸水膜内端与样品垫内端各自分别与硝酸纤维素膜搭接，在样品垫与硝酸纤维素膜的搭接部，两者之间夹置粘贴一段胶体金膜或乳胶颗粒膜7；胶体金膜或乳胶颗粒膜为含抗苯乙醇胺A抗体胶体金或乳胶颗粒标记的玻璃纤维膜，硝酸纤维素膜上有一条检测带和一条质控带，依次是：含苯乙醇胺A蛋白质偶联物的检测带10，含抗兔抗体或抗鼠抗体的质控带11，测试条置入检测卡外壳内，样品垫正对加样孔，硝酸纤维素膜正对检测窗孔。

采用上述苯乙醇胺A快速检测卡，检测样品为饲料、组织样品、尿液或血清，处理方法如下：

A、尿样或血清：取尿液或血清直接用作检测样品，若尿样呈浑浊状，须先经滤纸过滤或在15℃,4000r/min条件下离心10min；

B、饲料：称取0.5-1g饲料样品，加入1-2mL样品抽提液，在试管中搅拌1 min，静置10 min后，取清亮上层液作测试样品；

C、组织样品(肌肉、肝脏或肾脏) 取0.5-1g剪碎或匀浆过的动物组织样品，置于含1-2mL样品抽提液的试管中，扭紧管盖，振摇样品1 min后，经100℃水浴5分钟，冷却至室温，取清亮的中间部分作测试样品。

样品抽提液为：0.01mol/L PBST溶液（pH7.4），内含0.15mol/LNaCl、质量浓度0.5%吐温-20。

当检测带10和质控带11同时显现棕红色印迹，检测结果为阴性，表示被检测样品中苯乙醇胺A含量未超标。

当检测带10不显示颜色，只有质控带11显现棕红色印迹，检测结果为阳性，表示被检测样品中苯乙醇胺A含量超标。

当检测带10和质控带11均不显色，则表明测试条已失效。

本发明的有益效果：本发明的优点是能检测饲料、组织样品(肌肉、肝脏或肾脏)等样品中含有的苯乙醇胺A，易于制备且节省检测费用，使用方便，检测快速，灵敏度高，结果准确。

附图说明