[发明专利]一种低成本流水化生产组培苗的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种生产组培苗的方法，特别涉及一种低成本规模化生产组培苗的方法。

背景技术

植物组织培养即植物无菌培养技术，是根据植物细胞具有全能性的理论，利用植物体离体的器官（如根、茎、叶、茎尖、花、果实等）组织（如形成层、表皮、皮层、髓部细胞、胚乳等）或细胞（如大孢子、小孢子、体细胞等）以及原生质体,在无菌和适宜的人工培养基及光照、温度等人工条件下，能诱导出愈伤组织、不定芽、不定根，最后形成完整的植株。

但是，传统生产组培苗所使用的玻璃培养容器透光透气性差、成本高、重量大、有效重量小、搬运困难，易损坏。生产成本较高，生产效率较低，可以有更进一步低成本规模化生产组培苗技术的改进。

发明内容

本发明的目的在于提供一种易于推广的低成本组织培养容器，建立一种简便、低成本、流水化的组织培养方法。

为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：

本发明包括以下步骤：

（一）培养基的配制：

  （1） 称取以下重量分数的药品分别置于烧杯中：

KH₂PO₄  3.75

NH₄NO₃   36.43

KNO₃   41.94

CaCl₂·2H₂O  9.71

MgSO₄·7H₂O  8.17

在各烧杯中分别加入药品总重量33-34倍重的纯净水溶解后，按照所列各药品先后顺序将溶液缓慢混合入更大的烧杯中，同时不断搅拌，待用；

（2）称取以下重量分数的药品，药品总质量为（1）中药品总质量的1/22：

MnSO₄·4H₂O   10.8            ZnSO₄·7H₂O    4.17

H₃BO₃                 3.00            KI            0.40

Na₂MoO₄·2H₂O  0.12           CoCl₂·6H₂O     0.012

CuSO₄·5H₂O   0.012           FeSO₄·7H₂O    13.47

Na₂—EDTA     18.07          烟酸           0.24

维生素B6     0.24           维生素B1       0.05

甘氨酸        0.97           其余为肌醇

将以上药品置于烧杯中，加药品总重量1000倍重的纯净水溶解，

缓慢倒入（1）中配制好的溶液中，搅拌混匀后，待用；

（3）配制浓度为0.2mg/ml的6-苄氨基腺嘌呤（6-BA）和萘乙酸（NAA）溶液；

（4）称取（2）中药品总重量30倍的琼脂、150倍的蔗糖倒入（1）步骤中的溶液中搅拌，加热沸腾后，根据不同植物的试管苗加入不同体积的（3）配制的6-苄氨基腺嘌呤（6-BA）和萘乙酸（NAA）溶液，最后按（1）中药品总重量计，每4.53g定容到1000mL，再逐滴滴入氢氧化钾溶液（1N）调节培养基的PH值到5.8；

（二） 分装与灭菌：  

将配制好的培养基趁热分装入聚丙烯薄膜袋中，用小夹子固定在一个用铁丝做成的简易框架上使其直立，然后放入高压灭菌锅消毒，灭菌时间在121℃保持18～20min即可；

  （三）无菌操作：

（1）无菌操作实验器具和材料的准备：包括超净工作台的无菌处理，消毒双手及切割刀和镊子等操作工具；

（2）灭菌结束后，将简易架子放在超净工作台上，整理薄膜袋使其能够直立，用塑料袋封口机封住袋口，薄膜袋静置至培养基凝固，待用；