[发明专利]一种检测边鸡MSTN基因型的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及家禽育种领域，具体涉及一种用DNA分子标记筛选边鸡体重增长程度的方法中所使用到的检测边鸡MSTN基因型的试剂盒。

背景技术

传统的数量遗传学对数量性状遗传机制的理解建立在抽象的微效多基因假设基础上，将影响一个数量性状的所有基因当作一个整体来处理，而不考虑其中的各个基因是如何作用的。这一假说在多年的动植物育种中发挥了重要作用，推动了动植物育种工作的进展，在当时的理论和技术条件下不失为一个很好的基础。但这一假说不了解数量性状的遗传背景，不了解控制数量性状的基因在染色体上的位置及其传递规律，无法对其效应作出准确的估计，更不能从分子水平分离和定位该类基因。随着现代分子生物学技术的飞速发展，遗传学家和育种学家认识到控制数量性状的基因并非在基因组中随机分布，且存在影响数量性状的主效基因。

目前，在育种中对鸡体重增长程度的筛选方法主要是通过数量遗传学方法，而数量遗传学方法进展缓慢，寻找到合适的DNA标记用于辅助选择能增强选择的准确性、缩短世代间隔，加快遗传进展。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种检测边鸡MSTN基因型的试剂盒，根据该试剂盒的检测图谱可对边鸡体重进行标记辅助选择，不受环境影响。

本发明的原理是：DNA池测序发现边鸡MSTN基因外显子1的234bp处存在一个G→A突变，DNAMAN 5.22软件分析表明该位点为BbvI识别位点。针对该酶切位点设计特异性引物扩增边鸡基因组DNA，引物的扩增产物经BbvI酶切产生3种基因型（GG、GA 和AA）。无论是一世代还是二世代的边鸡，在6到18周龄时，AA和GA基因型边鸡的体重都显著或极显著高于GG型（P<0.05或P<0.01）。该单核苷酸突变能稳定遗传，选择的检测方法简单快捷，且不受外界环境的影响，可以用于边鸡体重选择的分子遗传标记，进行标记辅助选择。

一种用分子标记筛选边鸡体重增长程度的方法是：提取待测样本的鸡基因组DNA，经特异性引物扩增得到162bp的目的片段，目的片段经限制性内切酶BbvI酶切，酶切产物凝胶电泳后用银染显色，得到DNA的酶切图谱，根据图谱中条带的数量和大小对待测样本的MSTN基因型进行判断。

所述根据图谱中条带的数量和大小对待测样本基因型进行判断的方法是：仅有162bp条带的为体重增长快的纯合型样本，仅有127bp条带的为体重增长慢的纯合型样本；同时含有162bp和127bp条带的为体重增长快的杂合型样本，。

本发明还提供了边鸡MSTN基因在边鸡育种筛选中作为体重选择的分子遗传标记的应用。

所述分子遗传标记在应用于育种筛选时，选择MSTN基因中不含BbvI酶切位点的个体，即体重增长快的纯合型样本（AA型）。

本发明还公开了用于上述方法的试剂盒，该试剂盒由特异性引物、dNTPs、Taq DNA聚合酶、Mg²⁺、10×PCR缓冲液、BbvI酶、10×buffer BbvI和超纯水组成，其中所述的特异性引物的序列如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示。

提取待测样本的鸡基因组DNA后，利用该试剂盒进行PCR扩增和酶切，酶切产物经凝胶电泳后用银染显色，得到DNA的酶切图谱与图2比对，可直接判定基因型。

附图说明

图1是PCR产物图，Marker为GM331。

图2是BbvI酶切产物图，Marker为GM331。

具体实施方式

实施例1

1. 待测基因组DNA的提取

1.1 采血

一世代（137只）和二世代（117只）的边鸡母鸡采自山西省农科院畜牧兽医研究所，翅静脉采集血样0.5 mL左右，肝素钠抗凝，置冰盒带回实验室，-20℃保存。

1.2消化蛋白质和RNA

取抗凝血30 μL，放入1.5 mL离心管中，加入0.3 mL TE，0.3ml裂解液，10 μL RnaseA酶（2.5 mg/mL），8 μL蛋白酶K（20 mg/mL），颠倒混匀，55℃过夜，充分消化蛋白质和RNA。

有机溶剂提取DNA