[发明专利]一种基于多种微生物的急性毒性试验方法及其试剂盒

说明书

技术领域：

本发明涉及一种急性毒性的评价方法及其试剂盒，具体涉及一种基于多种微生物的急性毒性试验方法及其试剂盒。

背景技术：

微生物试验相对于其他生物试验方法，在毒性检测中具有不可比拟的优势。微生物世代时间短，可以大大缩短试验时间；操作容量小而受试生物量大，能够反映整个群体的染毒效应，而非个别效应；微生物适应力强，能用于各种灵敏度要求不同的环境样品的测定；没有道德上的争议存在。目前用于水质检测的微生物检测法主要有以下几种：生物发光法、生长抑制法、呼吸计量法、酶活法及硝化速率法等等。

脱氢酶活性法是其中一种应用较多的生物试验。应用脱氢酶检测样品毒性是通过测定毒物对细菌体内的脱氢酶活性的影响来确定毒物毒性。实验中应用细菌活细胞作为酶源，在毒物作用下，微生物代谢作用的任何改变必将影响反应系统中脱氢酶活性。脱氢酶在各种生物的新陈代谢中都起着重要的作用。通过测定废水、污染水体或化学品对脱氢酶活性的影响，了解污染物的毒性和生态学效应。在生物新陈代谢过程中，脱氢酶起着传递体作用，即将有机质的氢脱下，使有机质氧化，并将氢转移给氧化型化合物。在无氧反应系统中，受毒物作用，脱氢酶活性降低，其程度与毒物毒性存在一定关系，所以可以用毒物对脱氢酶活性的影响确定毒物毒性的大小。测定脱氢酶活性要用到四氮唑盐——一种在脱氢酶作用下还原为不同颜色的物质，用得较多的有TTC(2，3，5-氯化三苯基四氮唑)、MTT(溴化噻唑蓝四氮唑)、INT(碘硝基氯化四氮唑蓝)以及新一代水溶性的XTT(3，3′-[1-(苯氨酰基)-3，4-四氮唑]-二(4-甲氧基-6-硝基)苯磺酸钠)、WST-1(2-(4-碘苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2，4-苯二磺酸)-2H-四唑单钠盐)等。结合现代物理学的光电检测技术和计算机数据处理技术，还可制成便携式野外水质毒性检测仪，从而实现对水质毒性野外现场快速的检测。

发明内容：

本发明的第一目的是提供一种基于多种微生物急性毒性试验方法，利用该方法对待测样品的急性毒性进行检测，具有稳定性好，可靠的优点。

本发明的基于多种微生物的急性毒性试验方法，其特征在于，包括以下步骤：

以Comamonas testosterone HJK 1.4-9，Brevibacterium epidermidis HJK 2.11-1，Staphylococcus sciuri HJK8.2-17，Diaphorobacter nitroreducens HJK 2.2-7，Brevundimonas diminuta HJK 2.2-9，Pseudomonas Sp.HJK 1.6-3，Ochrobactrum anthropi HJK1.2-13，Citrobacter freundii HJK 2.3-11，Pantoea agglomerans HJK 2.3-6，Enterococcus casseliflavus HJK 2.3-10，Saccharomyces cerevisiae HJK 5.1-5作为受试微生物，利用脱氢酶活性法检测待测样品对上述11种微生物细胞的脱氢酶活性变化来评价待测样品的毒性大小。

本发明还提供一种检测待测样品急性毒性的检测试剂盒，包括受试微生物、培养受试微生物的培养液、培养受试微生物的器皿和四氮唑盐，其特征在于，所述的受试微生物为Comamonas testosterone HJK 1.4-9，Brevibacterium epidermidis HJK 2.11-1，Staphylococcus sciuri HJK8.2-17，Diaphorobacter nitroreducens HJK 2.2-7，Brevundimonas diminuta HJK 2.2-9，Pseudomonas Sp.HJK 1.6-3，Ochrobactrum anthropi HJK 1.2-13，Citrobacter freundii HJK 2.3-11，Pantoea agglomerans HJK 2.3-6，Enterococcus casseliflavus HJK 2.3-10和Saccharomyces cerevisiae HJK 5.1-5。

所述的培养受试微生物的器皿优选为96孔板，96孔板能使11种微生物和空白对照在同一个板上面反应，显示，便于利用和观察。

所述的四氮唑盐优选为2，3，5-氯化三苯基四氮唑。