[发明专利]一种培育抗黄瓜花叶病毒植物的方法

权利要求书

1.一种培育抗黄瓜花叶病毒植物的方法，其特征在于具体操作如下：

(1) 从感染黄瓜花叶病毒的植物组织中克隆CMV 1a基因的cDNA片段；

(2) 将克隆的cDNA片段与RNAi高通量植物表达载体pHellsgate2进行BP重组反应，构建CMV 1a RNAi植物表达载体；

(3) 将构建的CMV 1a的RNAi植物表达载体通过根癌农杆菌介导转入目标植物中；

(4) 以重组载体T-DNA上具有的抗性标记筛选转化子，并通过聚合酶链式反应获得真正的转基因植株，接种黄瓜花叶病毒，最后筛选出对黄瓜花叶病毒抗性明显增强的转基因植株。

2.根据权利要求1所述的培育抗黄瓜花叶病毒植物的方法，其特征在于CMV 1a基因的cDNA片段长344bp，位于CMV 1a全长基因序列的1673bp-2016bp之间。

3.根据权利要求1所述的培育抗黄瓜花叶病毒植物的方法，其特征在于黄瓜花叶病毒1a基因RNAi植物表达载体具有黄瓜花叶病毒1a基因发夹RNA表达盒。

4.根据权利要求1或3所述的培育抗黄瓜花叶病毒植物的方法，其特征在于黄瓜花叶病毒1a基因发夹RNA表达盒从上游至下游依次为花椰菜花叶病毒的35S启动子、表达1a基因发夹RNA的DNA分子和终止子。

5.根据权利要求4所述的培育抗黄瓜花叶病毒植物的方法，其特征在于表达1a发夹RNA的DNA分子由三个组件构成，中间组件为一个内含子，两边组件分别为344bp的黄瓜花叶病毒复制酶1a基因片段。

6.根据权利要求1或3所述的培育抗黄瓜花叶病毒植物的方法，其特征在于表达1a发夹RNA的DNA分子的内含子两端的组件为反向互补的基因序列。

7.根据权利要求4所述的培育抗黄瓜花叶病毒植物的方法，其特征在于表达1a发夹RNA的DNA分子的内含子两端的组件为反向互补的基因序列。

8.根据权利要求5所述的培育抗黄瓜花叶病毒植物的方法，其特征在于表达1a发夹RNA的DNA分子的内含子两端的组件为反向互补的基因序列。