[发明专利]甲胎蛋白(AFP)定量测定试剂盒及其检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及测定血清的试剂盒及其测试方法，尤其是涉及测定血清中甲胎蛋白(AFP)含 量的试剂盒及其测试方法。

背景技术

甲胎蛋白(AFP)是分子量为70KD的糖蛋白。正常情况下，在胎儿发育早期由肝脏和卵 黄囊合成，小量由胎儿卵黄素细胞及胎儿胃肠道合成。AFP是最主要的胎儿血清蛋白，出生 后在血清中的含量急速下降，第二年末降至最低值直至成年。临床上发现肝癌细胞和生殖系 肿瘤细胞可以合成AFP，使血清AFP浓度升高，因此血清AFP含量是早期诊断这类肿瘤的重 要指标。非恶性疾病的成人血清AFP升高的情况，主要出现在妊娠女性的第6-9个月，以及 一些肝病患者尤其是出现肝细胞病变者，如肝硬化、急慢性肝炎和肝坏死。妊娠女性AFP值 的异常预示发生唐氏症(Down syndrome)的可能。目前临床上检测AFP的方法主要有放免法， ELISA法，化学发光法等。

过去以放免为代表的甲胎蛋白(AFP)测定试剂盒受方法学的限制，其灵敏度和抗干扰能力 严重不足，存在很大的弊端，已基本上退出市场，目前应用较多的为酶联免疫检测技术和化 学发光技术。化学发光技术兴起于上个世纪80年代是继酶联免疫技术和放免技术之后发展起 来的新兴技术，由于其高灵敏度、高特异性，同时方法简便、快速，标记结合物稳定，无放 射性同位素损伤和污染等特点，在近些年得到了飞速发展。

磁微粒分离酶联免疫检测技术是一种以磁性微粒为固相分离载体，将免疫磁微粒分离技 术与酶联免疫检测技术相结合而建立的一种新型免疫检测方法。传统ELISA方法，抗原、抗 体的结合反应是在固相(ELISA板反应孔)表面进行的，而磁微粒分离酶联免疫检测方法，抗 原、抗体的结合反应也在近似液相的条件下进行，因而反应快速、彻底。与传统ELISA相比 具有灵敏度高，检测用时少的优点。

发明内容

本发明需要解决的技术问题在于提供一种甲胎蛋白(AFP)定量测定试剂盒及其检测方 法，采用该试剂盒进行AFP检测具有较高的灵敏度和特异性，和更短的获得检测结果的时间 和更简便的操作方式。

本发明提供了一种甲胎蛋白(AFP)的定量测定试剂盒，其包含的试剂有AFP磁分离试 剂，酶反应物，反应增强剂，稀释液，标准品、质控品，清洗液浓缩液以及底物溶液。

所述的磁分离试剂含有标记有抗AFP单克隆抗体的磁性微球。

所述的酶反应物是含有碱性磷酸酶标记的抗AFP单克隆抗体。

所述的反应增强剂是含有Tris的缓冲液。

所述稀释液是含有BSA溶液。

所述的标准品及质控品是含有一定量的AFP抗原的BSA蛋白溶液。

所述清洗液浓缩液是含有TWEEN-20和Proclin-300的缓冲液。

所述的底物溶液为酶促化学发光底物溶液。

本发明甲胎蛋白(AFP)的定量测定试剂盒的制备方法，包括下述步骤：

第一步：磁分离试剂的制备过程

一、磁珠缓冲液配制操作步骤，配制1L：

1、称取TRIS 4.58g和NaCl6.81g于1L容器中，称取0.96g TWEEN-20于20ml容器中加适量 水使其完全溶解后，倒入上述容器中；

2、用移液器将Proclin-300量取0.2ml于10ml纯化水的烧杯中完全溶解后，倒入上述1L容 器中，然后在上述1L容器中加入800ml纯化水，充分搅拌；

3、调节PH计测量其PH值，调PH，控制PH在7.95-8.05之间；

4、称取BSA 3g倒入上述1L容器中；

5、最后定容至1000ml，用0.2um滤器过滤；过滤完后贴好标签于2-8℃冷库贮存。

二、磁分离试剂的制备过程

1、将1.0mg辛二酸二琥珀酰亚胺酯溶于50ul DMSO中，取2mg抗AFP单克隆抗体溶于PH 9.5 的0.1mol/L PB缓冲液中至总体积为1ml；

2、确定辛二酸二琥珀酰亚胺酯的投入量，用移液枪吸取辛二酸二琥珀酰亚胺酯加入到步骤1 的抗体溶液中，置室温90min；

3、将步骤2抗体溶液加入到Centricon-10浓缩管中然后放入到高速冷冻离心机中在3000g 下浓缩30min至体积为0.5ml；

4、取0.5ml磁珠，加入5ml反应杯中，放入专用试管架，经磁铁吸附2分钟后吸取上清；