[发明专利]新的Melan-A表位肽及其在预防和/或治疗肿瘤中的用途

说明书

技术领域

本发明涉及免疫治疗领域，具体涉及肿瘤特异性抗原Melan-A的表位肽及其在预防和/或治疗肿瘤中的用途。

背景技术

免疫系统是人体抵御肿瘤的重要屏障。各种因素导致的肿瘤，如由于化学致癌剂或病毒导致的肿瘤，会使得肿瘤细胞出现表达突变蛋白、异位表达蛋白、正常蛋白表达水平过高和表达病毒蛋白等现象。在正常的免疫系统中，机体的免疫细胞可能会识别并清除这些异常细胞，从而使机体免于罹患肿瘤。而长期处于免疫抑制状态的人群，如器官移植、艾滋病患者等，肿瘤的发病率要远远高于正常人群。过继性T细胞免疫治疗则是肿瘤免疫治疗中的重要手段之一，专指向肿瘤患者输注具有抗肿瘤活性的免疫细胞，直接或通过激发机体免疫反应杀伤肿瘤细胞，以达到治疗目的的治疗方法(Nat Rev Cancer，2008.8(4)：299-308)。输注的细胞包括LAK、NK细胞、T淋巴细胞等。在一定的条件下，这些方法都获得了一定程度上的成功。如NK细胞在造血干细胞移植后的抗白血病效应，美国癌症协会(NCI)Rosenberg SA教授领导下进行的肿瘤浸润淋巴细胞对黑色素瘤的治愈率可以达到50％以上(Science，2002.298(5594)：850-854)。

近年来，随着一系列被CD4⁺T细胞识别的肿瘤抗原的鉴定，人们对于CD4⁺T细胞在抗肿瘤免疫反应中的作用有了更进一步的认识。但CD4⁺T淋巴细胞运用于过继性免疫治疗中的例子并不多。CD4⁺T淋巴细胞虽然不同于细胞毒性T淋巴细胞(在胞浆内含有穿孔素和颗粒酶等效应分子)，但在识别靶细胞后，却可以分泌大量的IFN-γ、IL-2等Th1类细胞因子。这些细胞因子不仅可以通过自分泌或旁分泌的方式为其它淋巴细胞提供生长因子，增强免疫提呈和淋巴细胞活化，而且可以直接促进肿瘤细胞的凋亡(Curr Opin Immunol，2004.16(3)：259-63)。CD4⁺T细胞在机体抗肿瘤免疫反应中起着重要的作用，同时激活CD4⁺T细胞和CD8⁺T细胞是免疫治疗的理想策略。

Melan-A为人类黑色素细胞分化抗原，表达于正常的黑色素细胞及几乎所有黑色素瘤患者的肿瘤细胞，而在其它组织中不表达(Melanoma Res，1998.8(4)：337-43)。Melan-A为黑色素瘤相关抗原中抗原性较强的一种，最易被体外黑色素瘤特异性多肽所激活的外周血淋巴细胞及肿瘤浸润淋巴细胞所识别。在Melan-A上有数个免疫优势表位，它们能在体内外诱导产生特异性T淋巴细胞免疫应答，因而在黑色素瘤特异性免疫治疗方面有着广阔的应用前景。

发明概述

本研究以亚洲人群为研究对象，通过合成长度为30个氨基酸，重叠部分为20个氨基酸的肽段覆盖Melan-A蛋白全长，在体外刺激人外周血单个核细胞(PBMC)，产生对Melan-A特异性反应的CD4⁺T淋巴细胞，从而鉴定出新的MHC-II类限制性Melan-A表位肽。该表位肽可用于体外刺激产生对Melan-A具有特异性反应性的CD4⁺T淋巴细胞。这些抗原特异性细胞，在接受抗原刺激后可以分泌大量可以直接或间接杀伤肿瘤细胞的细胞因子，因此能用于对表达Melan-A的肿瘤的过继性免疫治疗。该表位肽还可以用作预防和/或治疗表达Melan-A的肿瘤的疫苗。

因此，在一个方面，本发明提供了新的MHC-II类限制性Melan-A表位肽。

在另一个方面，本发明提供了制备对Melan-A具有特异性反应性的CD4⁺T淋巴细胞的方法。

本发明还提供了识别本发明的Melan-A表位肽并在识别后发生特异性反应的CD4⁺T淋巴细胞以及这些细胞在制备用于预防和/或治疗肿瘤的药物组合物中的用途。

最后，本发明还提供了包括本发明的Melan-A表位肽的用于预防和/或治疗肿瘤的疫苗。

附图说明

图1：显示来自健康供者106(HD106)的外周血单个核细胞经Me1an-A混合肽刺激两周后出现对Melan-A的特异性反应。

图2：显示来自HD106的对Melan-A具有特异性反应性的5号单克隆CD4⁺T细胞对Melan-A_21-50的特异性反应。

图3：来自HD106的5号单克隆CD4⁺T细胞对已知Melan-A表位肽的识别。