[发明专利]一种检测非编码小RNA的方法有效
| 申请号： | 201110235252.9 | 申请日： | 2011-08-17 |
| 公开（公告）号： | CN102952848A | 公开（公告）日： | 2013-03-06 |
| 发明（设计）人： | 高丰厚;郭跃辉;姜斌 | 申请（专利权）人： | 上海交通大学医学院附属第三人民医院 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;G01N27/447 |
| 代理公司： | 上海新天专利代理有限公司 31213 | 代理人： | 王敏杰 |
| 地址： | 201900 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 检测 编码 rna 方法 | ||
1.一种检测非编码小RNA的方法，其特征在于，步骤包括：
步骤1，在寡核苷酸探针的3’末端标记非同位素；
步骤2，将已标记非同位素的探针与样品RNA置于液体杂交环境中，使非编码小RNA和所述探针进行液相杂交形成杂化双链，分离所述杂化双链；
步骤3，定量或定性检测所述小RNA。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2中所述液相杂交，采用PCR仪或水浴进行退火。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述液体杂交环境包括杂交缓冲液，所述杂交缓冲液为磷酸盐缓冲液或Tris-HCl缓冲液。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述非同位素为生物素。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，分离所述杂化双链后，先将所述杂化双链转移至尼龙膜上，紫外线交联固定，加入所述HRP偶联链酶亲和素使所述杂化双链显色，然后进行步骤4。
6.根据权利要求1所述的方法，步骤1中所述寡核苷酸探针为待测小RNA的互补序列。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，定量检测所述小RNA方法为：分析电泳检测杂化双链条带灰度值和未杂交探针条带灰度值，其中，使步骤2中所述探针足量，所述小RNA含量计算公式为
。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述定量或定性检测采用非变性聚丙烯酰胺凝胶系统进行检测。
9.一种如上述任意一项权利要求所述的方法在检测非编码小RNA中的应用。
10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述非编码小RNA为miRNA。
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