[发明专利]微卫星杂合性缺失位点在鉴别肝癌克隆起源中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及微卫星杂合性缺失位点的应用，具体地说，是复发性肝癌或多结节性肝癌的克隆起源的微卫星杂合性缺失高频检测位点的筛选、组合及其应用。

背景技术

近年来，随着分子生物学技术的迅猛发展，癌基因及癌抑制基因的异常改变在人类恶性肿瘤的发生发展中的作用越来越受到重视，尤其是癌抑制基因功能丧失受到人们的重视。自1981年发现微卫星DNA，1993年在遗传性非息肉样结直肠癌中发现微卫星不稳定性（MSI）之后，人们又在很多肿瘤中发现了微卫星杂合性缺失(Loss of Heterozygosity，LOH)。利用微卫星标记位点进行 LOH分析技术，已成为癌抑制基因重要的筛选手段之一。

原发性肝细胞癌术后复发率可高达50%，严重制约肝癌远期手术疗效的提高。从肿瘤起源的角度探讨术后复发性肝细胞癌的发生方式，为制定科学的治疗对策提供参考依据，一直是肝癌临床十分关注的课题。我国肝癌90%以上具有HBV相关慢性肝炎或肝硬化的背景，在此基础上演变发展而来的肝异型增生结节就成为肝癌多克隆起源的重要病理学基础，此类肿瘤克隆既可以同时发生，也可以异时出现；而肝癌的高侵袭性行为又成为肝癌术后残留复发的重要途径。显然，无论是术后复发性肝癌还是多结节性肝癌，都存在单克隆和多克隆两种来源的可能性，但两者的治疗原则不同，如多克隆来源的复发性、多结节性肝癌治疗上仍可首选外科切除，预后也要好于单克隆来源的残癌复发，后者应更注重放射介入或超声介入等综合性治疗，但对于手术切除后经长期“冬眠”又复苏的残癌则特别需要与再次新生的肝癌相区别。

但由于不同克隆起源肝癌的临床、影像、生化和病理学表现重叠很大，从这些表现鉴别是新生肿瘤还是转移复发极为困难（丛文铭,等. 复发性肝癌的临床病理特点与发生方式探讨. 中国实用外科杂志,2009,29(1)：71-73.）。这种状况造成长期以来，一方面临床上有大量的复发性肝癌患者需要做克隆性检测以明确肿瘤的起源类型，另一方面因缺乏有效的肿瘤克隆适用性检测标志物，又常常给临床制订治疗方案带来很大困惑，导致临床长期不能在依据肝癌克隆性质的基础上制订个体化治疗方案，这在很大程度上也限制了肝癌患者疗效的进一步提高。

肿瘤的基因组微卫星杂合性缺失模式是稳定持续存在的，即原发性肝癌的微卫星杂合性缺失模式与其肝内转移性子瘤之间的微卫星杂合性缺失模式一致，而两个新生肿瘤之间的微卫星杂合性缺失模式则完全不同，其原理类似于法医检测DNA样本微卫星评估生物属性。

在人肝癌相关的肿瘤抑制基因的研究中，肝癌LOH研究结果已成为寻找新的肝癌相关肿瘤抑制基因的重要基础。肝癌克隆性检测不仅具有明显的肿瘤基础理论意义，而且对于临床肝癌诊治也具有实际的指导意义。具体地说，了解多结节性和术后复发性肝细胞癌的生物学特性与治疗模式和预后的关系，可以为临床上更合理的个体化治疗肝细胞癌提供有用的理论依据。多结节性肝细胞癌和术后复发性肝细胞癌克隆起源方式可分为肝内转移(intrahepatic metastasis，IM)和多中心发生(multicentric occurrence，MO)两种情况,前者属于单克隆起源，而后者为多克隆起源。判断肝细胞癌克隆起源对于患者治疗方案选择以及评估预后十分必要。从理论上讲，如果某个复发性肝癌为MO，那么其性质和生物学行为与一个新生的原发性肝细胞癌相同，手术疗效优于肝内转移引起的复发。但如果复发性肝癌为IM，即病灶来自癌细胞在肝内的扩散，由于手术难以切除全部癌灶而可能导致手术治疗效果不佳或失败。同样，多结节性肝细胞癌也存在类似的理论和实际问题。由此可见，准确检测LOH模式有利于对肿瘤治疗策略和预后评估提供分子依据，具有重要的临床意义。