[发明专利]一种室内检测杂交玉米种子纯度的方法

说明书

发明领域

本发明涉及玉米种子检测的技术领域。具体的说，本发明涉及一种室内检测杂交玉米种子纯度的技术领域。

背景技术

利用玉米盐溶蛋白电泳法测定杂交玉米种子纯度的方法已经在全国各地得到广泛应用，取得了较好的经济和社会效应，但是，目前普遍存在的试验过程比较繁琐，对于初学者来说难以快速掌握并得出清晰的谱带的技术缺陷。在现有技术提供的标准的试验方法里，浓缩胶和分离胶缓冲液需要在调好PH值后先定容，再用定容好的缓冲液来溶解丙烯酰胺等药品，然后再定容。在实际操作中试验人员很容易忘记给两种缓冲液定容，经常会直接拿未定容的缓冲液来溶解药品，结果就是前功尽弃，从头再来。如何简化或进一步研究一种快速简易适用于实验室检测杂交玉米种子纯度的方法具有广泛的实用性和重要性。

发明内容

针对现有技术目前普遍存在的试验过程比较繁琐，对于初学者来说难以快速掌握并得出清晰的谱带的技术缺陷，本发明旨在一种室内检测杂交玉米种子纯度的方法，该方法在传统试验方法的基础上加以简化，显著提高试验效率，比常规的试验操作时间节约2-3小时，操作实用简易，实用特性突显。

本发明的技术方案：通过配制电极缓冲液、样品提取液、分离胶缓冲液、分离胶溶液、浓缩胶缓冲液、浓缩胶溶液和催化剂溶液、染色液试剂，制备选用杂交玉米种子的样品和凝胶制备，通过采用电泳、卸板、染色、洗板，计算电泳测定值，保存胶板，计算出杂交玉米的纯度值。本发明采用一个分离胶和浓缩胶溶液配制的简便又不影响试验效果的方法，即取分离胶和浓缩胶缓冲液定容的步骤，简化胶溶液配制程序，缓冲液不定容，待溶解完药品后将溶液一次性定容，这样配出来的浓缩胶溶液和分离胶溶液用于试验丝毫不会影响谱带的清晰性和完整性，而且配溶液过程减少了两个定容环节，更易操作。

具体的，本发明提供一种室内检测杂交玉米种子纯度的方法，具体步骤如下：

1.按照常规配制方法，制备电极缓冲液、样品提取液、催化剂、染色液溶液备用。

2.分离胶溶液：取1.43ml乳酸钠于1000ml烧杯中，加去离子水900ml，用乳酸调至PH3.0，备用，取消常用的定容步骤；称取丙烯酰胺112.5g，甲叉双丙烯酰胺3.75g，抗坏血酸0.25g，硫酸亚铁8.0mg，用分离胶缓冲液溶解，定容至1000ml，过滤于棕色瓶中，放入4℃冰箱保存。

3.浓缩胶溶液：取0.30乳酸钠于200ml烧杯中，加去离子水90ml，用乳酸调至PH5.2，备用，取消常用的定容步骤；称取丙烯酰胺6.00g，甲叉双丙烯酰胺1.00g，抗坏血酸0.03g，硫酸亚铁0.8mg，用浓缩胶缓冲液溶解，定容至100ml，贮于棕色瓶中，放入4℃冰箱保存。

4.从送验样品中随机数取玉米种子100粒，用单籽粒粉碎器逐粒粉碎，放入1.5ml离心管中，按体积比1∶1.2的量用滴管加入样品提取液，摇匀，放置5min后再摇一次，静置30min后备用，取消了常用的样品提取液的离心步骤。

5.凝胶的制备：装槽、封底的操作采用常用的方法；

灌分离胶采用：底缝封住后，吸去因凝胶而析出的水，量取分离胶溶液，加入过氧化氢或过硫酸铵溶液，迅速摇匀；倾斜电泳槽，将分离胶溶液倒入两玻璃板之间，高度距短玻璃板上沿1.2cm，放平电泳槽并在试验台上振动后静置于桌面10min，取消了常用正丁醇镇压分离胶液面的步骤。

灌浓缩胶：量取浓缩胶溶液，加入过氧化氢或过硫酸铵溶液，迅速摇匀，倒入两玻璃板之间，马上插好样品梳，样品梳底部距分离胶顶部0.5cm。

6.点样、电泳、卸板、染色的操作采用常用的方法。

通过实施本发明具体的发明内容，可以达到以下技术效果：

1.本发明提供了室内检测杂交玉米种子纯度的简易方法。在常用的试验方法里，浓缩胶和分离胶缓冲液需要在调好PH值后先定容，再用定容好的缓冲液来溶解丙烯酰胺等药品，然后再定容。在实际操作中试验人员很容易忘记给两种缓冲液定容，经常会直接拿未定容的缓冲液来溶解药品，结果就是前功尽弃，从头再来。采用本发明，缓冲液不定容，待溶解完药品后将溶液一次性定容，这样配出来的浓缩胶溶液和分离胶溶液用于试验丝毫不会影响谱带的清晰性和完整性，而且配溶液过程减少了两个定容环节，更易操作，减少试验时间30min。