[发明专利]抗体片段修饰的微梁制备方法和基于抗体片段修饰的微梁免疫传感检测系统

权利要求书

1.一种制备微悬臂梁的方法，包括以下步骤：

1)提供抗体和带有镀金层的微悬臂梁；

2)酶解步骤：用蛋白酶将所述抗体裂解成Fab片段和多个小分子片段，所述蛋白酶为能够将抗体裂解成Fab片段的任何酶，优选木瓜蛋白酶；

3)固定步骤：将包含巯基官能团和羧基或氨基官能团的巯基化试剂结合至微悬臂梁的镀金层表面上；

4)联结步骤：将步骤2)获得的Fab片段与步骤3)获得的已经结合在微悬臂梁上的巯基化试剂联结在一起，得到镀金层表面上固定有Fab片段的微悬臂梁。

2.一种制备微悬臂梁的方法，包括以下步骤：

1)提供抗体和带有镀金层的微悬臂梁；

2)酶解步骤：用蛋白酶将所述抗体裂解成Fab片段和多个小分子片段，所述蛋白酶为能够将抗体裂解成Fab片段的任何酶，优选木瓜蛋白酶；

3)联结步骤：将步骤2)获得的Fab片段与包含巯基官能团和羧基或氨基官能团的巯基化试剂联结在一起；

4)固定步骤：将步骤3)获得的一端与Fab片段联结的所述巯基化试剂的另一端结合至微悬臂梁的镀金层表面上，得到镀金层表面上固定有Fab片段的微悬臂梁。

3.一种应力传感元件，其包括基于应力的微悬臂梁，所述微悬臂梁的镀金层上固定有抗体的Fab片段。

4.一种基于应力的微悬臂梁免疫传感检测系统，其包括权利要求3的应力传感元件。

5.一种使用微悬臂梁传感检测系统免疫传感检测待测样品的方法，包括以下步骤：

1)提供对靶抗原特异的抗体和微悬臂梁传感检测系统，所述微悬臂梁传感检测系统包括反应池和带有镀金层的基于应力的微悬臂梁；

2)酶解步骤：用蛋白酶将所述抗体裂解成Fab片段和多个小分子片段，所述蛋白酶为能够将抗体裂解成Fab片段的任何酶，例如木瓜蛋白酶；

3)固定步骤：将包含巯基官能团和羧基或氨基官能团的巯基化试剂结合至微悬臂梁的镀金层表面上；

4)联结步骤：将步骤2)获得的Fab片段与步骤3)获得的已经结合在微悬臂梁上的所述巯基化试剂联结在一起，得到镀金层表面上固定有Fab片段的微悬臂梁。

5)将步骤4)获得的固定有Fab片段的微悬臂梁固定到微悬臂梁传感检测系统的反应池中；

6)将待测样品加入至步骤5)获得的微悬臂梁传感检测系统中，检测待测样品中是否存在所述靶抗原。

6.一种使用微悬臂梁传感检测系统免疫传感检测待测样品的方法，包括以下步骤：

1)提供对靶抗原特异的抗体和微悬臂梁传感检测系统，所述微悬臂梁传感检测系统包括反应池和带有镀金层的基于应力的微悬臂梁；

2)酶解步骤：用蛋白酶将所述抗体裂解成Fab片段和多个小分子片段，所述蛋白酶为能够将抗体裂解成Fab片段的任何酶，例如木瓜蛋白酶；

3)联结步骤：将步骤2)获得的Fab片段与包含巯基官能团和羧基或氨基官能团的巯基化试剂联结在一起；

4)固定步骤：将步骤3)获得的一端与Fab片段联结的所述巯基化试剂的另一端结合至微悬臂梁的镀金层表面上，得到镀金层表面上固定有Fab片段的微悬臂梁；

5)将步骤4)获得的固定有Fab片段的微悬臂梁固定到微悬臂梁传感检测系统的反应池中；

6)将待测样品加入至步骤5)获得的微悬臂梁传感检测系统中，检测待测样品中是否存在所述靶抗原。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法、应力传感元件或免疫传感检测系统，其特征在于所述巯基化试剂选自硫醇类化合物，例如11-羧基硫醇、2-氨基乙硫醇和3-巯基丙酸；盐酸硫醇亚胺；磺基烃基琥珀酰亚胺基-6-(3’2-吡啶二硫-丙酰胺)-乙酸酯；3，3’-二硫双磺基琥珀酰亚胺丙酸酯中的一种或多种。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法、应力传感元件或免疫传感检测系统，其特征在于所述抗体为IgM、IgG、IgA、IgD、IgE中的任一种。