[发明专利]去除干扰的干化学定量测试试条、谷丙或谷草转氨酶定量测试试条及检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种干化学测试试条及测试方法，尤其涉及一种转氨酶的干化学测试试条及检测方法。

背景技术

干化学测试中的干扰物很多，比如氧化还原反应测定中的尿酸、抗坏血酸等的干扰，转氨酶检测中的丙酮酸干扰，尤其以转氨酶中的丙酮酸干扰较为严重。

转氨酶的种类很多，其中以谷丙转氨酶(GPT/ALT)和谷草转氨酶(GOT/AST)最为重要。谷丙转氨酶又称丙氨酸氨基转移酶，是催化谷氨酸与丙酮酸之间的转氨作用；谷草转氨酶又称门冬氨酸氨基转移酶，是催化谷氨酸与草酰乙酸之间的转氨作用。临床上，全血、血清、血浆、组织液中这两种转氨酶的测定，是心脏病、肌肉疾病、尤其是肝病诊断中非常重要的指标。

临床上测定上述两种转氨酶的方法，主要是使用生化分析仪的液体试剂的方法，此方法是利用乳酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶分别催化谷丙转氨酶产物丙酮酸和谷草转氨酶产物草酰乙酸脱氢，消耗烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)，引起吸光值在340nm的变化。此变化率与谷丙转氨酶、谷草转氨酶活性有比例关系，从而得出酶活性。

上文提到的反应如下：

谷丙转氨酶：

谷草转氨酶：

此方法耗时、操作复杂、需要比较大型的仪器；并且在该方法中，随着反应的进行，NADH不断消耗，340nm的吸光度不断减少。因为仪器等方面的原因，初始的NADH不能太高，这使得该方法的测试范围受到影响，在测试转氨酶高值样品时容易出现假阴性。

干化学方法具有方便、灵活、污染小、操作简便等特点。目前，干化学方法大致可以分为以下几类：以雅培为代表的电化学方法(如美国专利US6565738)。富士、柯达、强生为代表的多层膜片法(如美国专利US4897347、US5508173、US5462858)。以罗氏为代表的横向流动干化学法(如美国专利US4591553、US5508173、US4665023)。然而，前述方法都存在部分缺陷，比如雅培电化学法测试谷丙转氨酶，采用谷氨酸氧化酶法氧化反应(1)产生的L-谷氨酸，但是存在内源性的丙氨酸干扰(比内源性的丙酮酸更为常见)，影响测试结果。而富士为代表的多层膜片法、罗氏为代表的干化学方法，均采用偶联丙酮酸氧化酶法。采用偶联丙酮酸氧化酶方法的反应过程如下：

谷丙转氨酶，在反应(1)后偶联

谷草转氨酶，在反应(3)后偶联

根据专利US4665023，其试条的结构如图1所示，血液样品加在扩散层1上，经过滤血膜3滤血后，血浆流到流动垫5上。加样后1min，下压透明的保护层9，试剂层6和酶结合垫4与流动垫相接触。固定在试剂层6上的显色剂、酶底物和固定在酶结合垫4上的丙酮酸氧化酶、过氧化物酶复溶到样品中，从而产生可检测的颜色信号。

从测试原理中可以清晰地看出，该方法存在内源性丙酮酸的干扰。提供颜色信号的丙酮酸，既有酶催化产生的，也有样品中本身存在的内源性丙酮酸。而采用速率法(即测试显色的变化率)，去除内源性干扰需要比较复杂的光学仪器，常常采用积分球等光学器件，并且转氨酶的正常值一般很低，谷丙转氨酶为5U/L～40U/L，谷草转氨酶为8U/L～40U/L，而丙酮酸的正常参考值相对较高，为65μmol/L(相当于65U/L转氨酶在1min产生的丙酮酸)，在较短的干化学测试时间(2min～3min)内，显色剂显色的变化率也会在一定程度上受内源性丙酮酸的影响，容易出现假阳性结果。

发明内容

本发明要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种测量结果准确、制备简单、测试成本低、检测操作方便的去除干扰的干化学定量测试试条及特别针对谷丙或谷草转氨酶的定量测试试条，还提供一种操作简便、测试成本较低、检测结果准确、检测精度高的用该谷丙或谷草转氨酶的定量测试试条定量检测血液中谷丙或谷草转氨酶的方法。