[发明专利]一种输送siRNA的免疫纳米载体及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种输送siRNA的免疫纳米载体，其中，所述免疫纳米载体的活性成分为单链抗体与siRNA输送载体的偶联产物，所述siRNA输送载体为超顺磁性氧化铁纳米粒子与聚乙二醇-聚乙烯亚胺偶联形成的聚乙二醇-聚乙烯亚胺-超顺磁性氧化铁纳米颗粒。

2.根据权利要求1所述的免疫纳米载体，其中，所述单链抗体与聚乙二醇-聚乙烯亚胺-超顺磁性氧化铁纳米颗粒以等摩尔比构建偶联产物。

3.根据权利要求1所述的siRNA输送载体，其中，所述聚乙二醇-聚乙烯亚胺为单甲基醚聚乙二醇接枝支化聚乙烯亚胺形成的水溶性共聚物，所述水溶性共聚物通过配体交换包裹超顺磁性氧化铁纳米粒子。

4.根据权利要求1所述的siRNA输送载体，其中，所述超顺磁性氧化铁纳米粒子的分子量控制在40-60kD之间，聚乙二醇-聚乙烯亚胺的分子量控制在40-60kD之间；所述纳米颗粒的平均粒径为60-80nm，表面zeta电位为30-40mV。

5.根据权利要求1所述的免疫纳米载体，其中，所述单链抗体为人源性CD44v6单链抗体，所述人源性CD44v6单链抗体基因具有如SEQ ID NO.1的核素序列，所述人源性CD44v6单链抗体具有如SEQ ID NO.2的氨基酸序列。

6.一种输送siRNA的免疫纳米载体的制备方法，其包括如下步骤：

(1)将末端带有羧基和马来酰亚胺的聚乙二醇水溶液与带有巯基单链抗体混合，4℃孵育过夜，巯基与马来酰亚胺偶联，形成单链抗体-末端带有羧基的聚乙二醇；

(2)复合溶液用PBS超滤洗涤，截留分子量为5kDa，去除未偶联的聚乙二醇；

(3)超滤后得到的单链抗体-末端带有羧基的聚乙二醇与siRNA输送载体以摩尔比混合，4℃孵育过夜，偶联形成输送siRNA的免疫纳米载体；

所述siRNA输送载体为超顺磁性氧化铁纳米粒子与聚乙二醇-聚乙烯亚胺偶联形成的聚乙二醇-聚乙烯亚胺-超顺磁性氧化铁纳米颗粒；所述siRNA输送载体和单链抗体以等摩尔比构建偶联产物。

7.根据权利要求5所述的制备方法，其中，所述单链抗体为人源性CD44v6单链抗体，所述人源性CD44v6单链抗体基因具有如SEQ ID NO.1的核素序列，所述人源性CD44v6单链抗体具有如SEQ ID NO.2的氨基酸序列。

8.一种真核细胞靶向转染液，其中，所述转染液包括siRNA和如权利要求1-5中任意一项所述的免疫纳米载体，所述siRNA被吸附于免疫纳米载体形成复合物。

9.如权利要求1-5中任意一项所述的免疫纳米载体在制备癌症基因治疗药物中的应用。

10.如权利要求8所述的真核细胞靶向转染液在制备癌症基因治疗药物中的应用。