[发明专利]一种从转基因哺乳动物乳液中分离重组人抗体的方法

权利要求书

1.一种从转基因哺乳动物乳液中分离重组人抗体的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将转基因哺乳动物乳液进行脱脂预处理，获得脱脂乳；

(2)将所得脱脂乳进行去除酪蛋白处理，获得含目标抗体的乳清液；

(3)将所得乳清液进行免疫亲和层析，从洗脱峰中获得目标抗体，其中，免疫亲和层析介质的配基为针对人抗体种属特征区域的单克隆抗抗体或其可变区。

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，脱脂预处理步骤为座式离心，室温下10000g离心30分钟；或碟式离心，48℃、3000g离心。

3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，去除酪蛋白步骤为：

(1)酸性沉淀法，室温调节脱脂乳pH为4.0～5.0，静置后离心收集上清液；或

(2)钙盐沉淀法，室温向脱脂乳中添加0.1～0.5M钙盐，静置后离心收集上清液；或

(3)凝乳酶法，室温或37℃向脱脂乳中添加0.5％～1.5％的凝乳酶，静置后离心收集上清液；或

(4)超滤法，调节脱脂乳pH值为6.0～8.0，采用截留分子量200～1000KD的超滤膜超滤，收集滤出液。

4.根据权利要求3所述方法，其特征在于，酸性沉淀法中室温调节脱脂乳pH值为4.5～4.8；超滤法中调节脱脂乳pH值为6.0～8.0。

5.根据权利要求1所述方法，其特征在于，免疫亲和层析步骤中所使用的免疫亲和层析缓冲液体系为磷酸盐缓冲液或三羟甲基氨基甲烷-盐酸缓冲液或磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液；平衡缓冲液为20～100mM，pH 6.0～8.0的磷酸盐缓冲液；洗脱缓冲液为盐酸溶液或磷酸溶液或硫酸溶液或乙酸溶液。

6.根据权利要求5所述方法，其特征在于，免疫亲和层析步骤中所使用的免疫亲和层析缓冲液体系为磷酸盐缓冲液；洗脱缓冲液为浓度0.2～1.0M乙酸溶液。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，免疫亲和层析中，调节乳清液pH为5.0～10.0。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，免疫亲和层析过程乳清液体积为0.5～10.0倍层析柱体积。

9.根据权利要求1所述方法，其特征在于，所述方法还包括将免疫亲和层析中穿透峰进行精分离处理的步骤，所述精分离处理步骤为：

(1)疏水层析，室温加入硫酸铵粉末使得穿透峰硫酸铵浓度为0.5-1.5M，使用低盐缓冲液洗脱、并收集含有重组人抗体的洗脱组分；或

(2)离子交换层析，室温调节穿透峰pH为5.0-10.0，使用高盐缓冲液洗脱、并收集含有重组人抗体的洗脱组分；或

(3)凝胶过滤层析，介质为Superdex 200。