[发明专利]一种高效诱导棉花体胚发生与植株再生的方法及其培养基

说明书

技术领域

本发明涉及一种高效诱导棉花体胚发生与植株再生的方法及其培养基。

背景技术

棉花是重要的经济作物，其细胞和组织培养研究已取得了很大的进展，并初步建立和完善了棉花组织培养的技术体系。棉花组织培养、离体再生作为棉花细胞工程和基因工程的基础技术，在棉花遗传改良中有着极为重要的作用。然而，棉花是较难通过体细胞胚胎发生途径获得再生植株的作物，表现为在组织培养中基因型依赖性强且周期长，重复性差。另外，在棉花体细胞胚胎发生过程中，体胚发生效率低且畸形胚胎频率高。

发明内容

本发明的目的是提供一种高效诱导棉花体胚发生与植株再生的方法及其培养基。

本发明所提供的培养基为用于获得棉花体细胞再生植株的成套培养基，分为只由活性成分组成的便于存放的贮存型培养基和由所述贮存型培养基和水配成的即用型培养基。

所述用于获得棉花体细胞再生植株的成套培养基，其中的贮存型培养基，由独立包装的培养基A、培养基B和培养基C组成；

所述培养基A为由改良MS基本培养基、激素、葡萄糖和凝固剂组成的培养基；

所述培养基B为由所述改良MS基本培养基、激素、葡萄糖和氨基酸添加物组成的培养基；

所述培养基C为由所述改良MS基本培养基、激素、葡萄糖、氨基酸添加物和凝固剂组成的培养基；

所述改良MS基本培养基由下述质量份的营养成分组成：

NH₄NO₃ 825份、KNO₃ 3800份、KH₂PO₄ 170份、CaCl₂·2H₂O 440份和MgSO₄·7H₂O370份；KI 0.83份、Na₂MoO₄·2H₂O 0.25份、H₃BO₃ 6.2份、CuSO₄·5H₂O 0.025份、MnSO₄·4H₂O 22.3份、CoCl₂·6H₂O 0.025份和ZnSO₄·4H₂O 8.6份；Na₂EDTA 37.3份和FeSO₄·7H₂O 27.8份；烟酸0.5份、肌醇100份、盐酸硫胺素0.1份、盐酸吡哆素0.5份和甘氨酸2.0份；

所述激素为吲哚丁酸和激动素，所述吲哚丁酸和所述改良MS基本培养基在所述培养基A、培养基B和培养基C中的配比满足0.3份-1.0份所述吲哚丁酸/825份NH₄NO₃，具体可为0.3份所述吲哚丁酸/825份NH₄NO₃或0.6份所述吲哚丁酸/825份NH₄NO₃或1.0份所述吲哚丁酸/825份NH₄NO₃；所述激动素和所述改良MS基本培养基在所述培养基A、培养基B和培养基C中的配比满足0.05份-0.3份所述激动素/825份NH₄NO₃，具体可为0.05份所述激动素/825份NH₄NO₃或0.15份所述激动素/825份NH₄NO₃或0.3份所述激动素/825份NH₄NO₃；所述吲哚丁酸与所述激动素在所述培养基A、培养基B和培养基C中的质量份之比均为(7.00-3.00)∶1，具体可为6∶1或4∶1或3.33∶1；

所述葡萄糖和所述改良MS基本培养基在所述培养基A、培养基B和培养基C中的配比满足25000份-35000份所述葡萄糖/825份NH₄NO₃，具体可为25000份所述葡萄糖/825份NH₄NO₃或30000份所述葡萄糖/825份NH₄NO₃或35000份所述葡萄糖/825份NH₄NO₃；