[发明专利]脊尾白虾EcSSR1024微卫星DNA标记的检测方法

权利要求书

1.脊尾白虾EcSSR1024微卫星DNA标记的检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：首先提取脊尾白虾基因组DNA并稀释备用；再利用脊尾白虾基因组文库中的EcSSR1024微卫星核心序列，在其序列两端设计特异性引物；然后使用该引物对脊尾白虾不同地理群或群内个体的基因组DNA进行PCR扩增，对PCR产物进行检测；利用产物出现的条带进行分析，确定每个个体的基因型，从而获得脊尾白虾在EcSSR1024核心序列区高度遗传变异的多态性图谱；

EcSSR1024微卫星核心序列的特异性引物序列分别为：正链5’- TGCAGCCACCTTAACGCG -3’，负链3’- CCCAATGCCTTTCAACTG -5’，使用该引物时的退火温度为57℃。

2.根据权利要求1所述的脊尾白虾EcSSR1024微卫星DNA标记的检测方法，其特征在于, 所述脊尾白虾基因组DNA的稀释浓度为50ng/μL，每个PCR反应中加入3μL，反应总体积为20μL。

3.根据权利要求1所述的脊尾白虾EcSSR1024微卫星DNA标记的检测方法, 其特征在于，所述PCR扩增的反应体系为：每个PCR反应总体积为20μL，包括50ng/μL脊尾白虾基因组DNA3μL；2.5mmol/L dNTP 1.6μL；含15 mmol/L Mg2+ 的10×PCR Buffer 2μL；5U/μL的Taq酶0.2μL；引物10mmol/L各1μL；最后加ddH2O至20μL。

4.根据权利要求1所述的脊尾白虾EcSSR1024微卫星DNA标记的检测方法, 其特征在于，使用所述特异性引物时设置PCR仪的程序参数为：95℃预变性5min；95℃变性45s，57℃退火45s，72℃延伸45s，25个循环；最后72℃再延伸10min；4℃保存。

5.按照权利要求1所述的的脊尾白虾EcSSR1024微卫星DNA标记的检测方法，其特征在于, 对PCR产物的检测：将PCR产物在6%的变性聚丙烯酰胺凝胶，12W恒功率电泳1～1.5h进行分离；将胶板通过10%的冰醋酸溶液20min→蒸馏水6min→0.1%的硝酸银溶液25min→3%的碳酸钠溶液显色数分钟，终止反应即可得到脊尾白虾在EcSSR1024基因座位高度遗传变异的多态性图谱。