[发明专利]用于在蓝细菌中提高脂肪醇产量的构建体和方法

权利要求书

1.一种构建体，其中，所述构建体包含与在蓝细菌中具有活性的启动子可操作地连接的基因，所述基因选自：

1)脂肪酰辅酶A合成酶基因；

2)其核苷酸序列与1)中的基因的序列具有至少80％同一性，优选地至少85％同一性，更优选地至少90％同一性，更优选地至少95％同一性，例如至少96％同一性，至少97％同一性，至少98％同一性，或至少99％同一性，并且编码具有脂肪酰辅酶A合成酶活性的蛋白质的基因；或

3)其核苷酸序列在严紧杂交条件，优选高严紧杂交条件下能够与1)中的基因的序列杂交，并且编码具有脂肪酰辅酶A合成酶活性的蛋白质的基因。

2.权利要求1的构建体，其中所述启动子是组成型启动子或诱导型启动子，优选地所述启动子选自：psbA2启动子，rbc启动子，petE启动子，cmp启动子，sbt启动子或trc启动子，更优选地所述启动子具有SEQ ID NO：6所示的序列。

3.权利要求1或2的构建体，其中所述基因是脂肪酰辅酶A合成酶基因，优选来源于集胞藻PCC6803的slr1609基因，来源于蓝杆藻ATCC 51142的cce_1133，来源于聚球藻7002的SYNPCC7002_A0675，来源于聚球藻PCC 6301的syc0624_c，来源于聚球藻PCC 7942的Synpcc7942_0918，和来源于鱼腥藻PCC 7120的alr3602；例如所述基因具有如SEQ ID NO：1所示的序列。

4.权利要求1-3中任一项的构建体，其中所述蓝细菌是能够产生脂肪醇的蓝细菌，其经基因工程改造而能够表达脂肪酰辅酶A还原酶；优选地，所述能够产生脂肪醇的蓝细菌选自集胞藻Syn-XT14，Syn-XT34和Syn-XT51。

5.权利要求1-4中任一项的构建体，其中所述构建体还可以包含用于筛选蓝细菌转化体的标记基因；优选地，所述标记基因是卡那霉素抗性基因，红霉素抗性基因或壮观霉素抗性基因。

6.权利要求5的构建体，其中所述标记基因位于所述在蓝细菌中具有活性的启动子的上游或下游。

7.权利要求1-6中任一项的构建体，其中所述构建体在两端分别具有psbA2基因的上游片段和下游片段；优选地，所述psbA2基因的上游片段具有如SEQ ID NO：6所示的序列；优选地，所述psbA2基因的下游片段具有如SEQ ID NO：7所示的序列。

8.一种载体，其包含权利要求1-7中任一项的构建体。

9.包含权利要求1-7中任一项的构建体和/或权利要求8的载体的蓝细菌。

10.权利要求9的蓝细菌，所述蓝细菌是能够产生脂肪醇的蓝细菌。

11.权利要求9或10的蓝细菌，其是于2011年5月20日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(China GeneralMicrobiological Culture Collection Center，CGMCC)的蓝细菌GQ5，其保藏号为CGMCC 4890。