[发明专利]用于检测亚铜离子的荧光传感器蛋白、质粒或细胞、编码该蛋白的DNA及制备方法

权利要求书

1.一种用于检测亚铜离子的荧光传感器蛋白，其特征在于，在增强绿色荧光蛋白内插入对亚铜离子响应的蛋白域，得到所述荧光传感器蛋白，使得在单一时间所述荧光传感器蛋白中的荧光蛋白和亚铜离子结合蛋白只有一个能够正确折叠。

2.如权利要求1所述的用于检测亚铜离子的荧光传感器蛋白，其特征在于，在增强绿色荧光蛋白中的第6个和第7个beta片间的环状区域插入亚铜离子结合蛋白Amt1，得到所述荧光传感器蛋白。

3.如权利要求所述的用于检测亚铜离子的荧光传感器蛋白，其特征在于，所述荧光传感器蛋白的序列为：

MVSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTLKFICTTGKLPVPWPTLVTTLTYGVQCFSRYPDHMKQHDFFKSAMPEGYVQERTIFFKDDGNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNlgRGRPPTTCDHCKDMRKTKNVNPSGSCNCSKLEKIRQEKGITIEEDMLMSGNMDMCLCVRGEPCRCHARRKRTQKSlgYNSHNVYIMADKQKNGIKVNFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALSKDPNEKRDHMVLLEFVTAAGITLGMDELYK。

4.编码权利要求1或2所述荧光传感器蛋白的DNA。

5.如权利要求3所述DNA，其特征在于，其序列为

ATGGTGAGCAAGGGCGAGGAGCTGTTCACCGGGGTGGTGCCCATCCTGGTCGAGCTGGACGGCGACGTAAACGGCCACAAGTTCAGCGTGTCCGGCGAGGGCGAGGGCGATGCCACCTACGGCAAGCTGACCCTGAAGTTCATCTGCACCACCGGCAAGCTGCCCGTGCCCTGGCCCACCCTCGTGACCACCCTGACCTACGGCGTGCAGTGCTTCAGCCGCTACCCCGACCACATGAAGCAGCACGACTTCTTCAAGTCCGCCATGCCCGAAGGCTACGTCCAGGAGCGCACCATCTTCTTCAAGGACGACGGCAACTACAAGACCCGCGCCGAGGTGAAGTTCGAGGGCGACACCCTGGTGAACCGCATCGAGCTGAAGGGCATCGACTTCAAGGAGGACGGCAACATCCTGGGGCACAAGCTGGAGTACAACCTCGGGCGTGGTCGTCCGCCGACCACCTGCGACCACTGCAAAGACATGCGTAAAACCAAAAACGTTAACCCGTCTGGTTCTTGCAACTGCTCTAAACTGGAAAAAATCCGTCAGGAAAAAGGTATCACCATCGAAGAAGACATGCTGATGTCTGGTAACATGGACATGTGCCTGTGCGTTCGTGGTGAACCGTGCCGTTGCCACGCTCGTCGTAAACGTACCCAGAAATCTCTCGGGTACAACAGCCACAACGTCTATATCATGGCCGACAAGCAGAAGAACGGCATCAAGGTGAACTTCAAGATCCGCCACAACATCGAGGACGGCAGCGTGCAGCTCGCCGACCACTACCAGCAGAACACCCCCATCGGCGACGGCCCCGTGCTGCTGCCCGACAACCACTACCTGAGCACCCAGTCCGCCCTGAGCAAAGACCCCAACGAGAAGCGCGATCACATGGTCCTGCTGGAGTTCGTGACCGCCGCCGGGATCACTCTCGGCATGGACGAGCTGTACAAG。

6.权利要求3或4所述DNA的制备方法，其特征在于，将限制性内切酶aval酶切位点特异性的引入绿色荧光蛋白EGFP中连接第6个和第7个beta片中间的环形区域，再用Aval去酶切，纯化出线性部分后与两端有Aval黏性末端的Amt1 DNA做连接反应，即可得到编码荧光传感器蛋白的DNA。