[发明专利]用细胞系生产兔瘟疫苗的方法及其制品

说明书

技术领域

本发明涉及一种用细胞系生产兔瘟疫苗的方法及其制品，属于兽用疫苗领域。

背景技术

兔病毒性出血症(rabbit heamorrhagic disease，RHD)是1984年由我国首次发现并报道的新病毒病。由于其发病急、传播快、发病率和死亡率都相当高，所以又俗称“兔瘟”，是兔的一种以全身性出血和多发性血管内凝血为主要症状的急性、烈性、病毒性传染病。目前，国内各省(市)均有流行。意大利、德国、法国、前捷克斯洛伐克、前苏联、西班牙、墨西哥、朝鲜和日本等国家也有发生。给全世界养兔业造成了巨大的经济损失，国际兽医局将该病列为B类传染病，我国农业部96号令颁布为二类疫病。RHD出现比较突然且流行速度极快，现有研究结果表明世界范围内的所有RHDV分离株均为同一血清型，无论是遗传特性还是抗原性都很稳定。

目前用兔病毒性出血症组织灭活疫苗免疫是预防该病的主要措施，疫苗的制备过程中必须以RHDV感染致死的兔内脏组织为原料。如中国专利CN88108859.5公开了一种用病兔肝组织培养RHD病毒及生产兔瘟疫苗的方法，但该方法疫苗的制备过程中必须以RHDV感染致死的兔内脏组织为原料，而用于制备组织灭活疫苗的非免疫兔的供应量却很不稳定，造成传统的组织灭活疫苗的成本不断增加，另外组织灭活疫苗存在散播强毒的潜在危险、批间差异大、产量不高等种种缺点。

近年来，随着兔产品等行业的兴起以及其他动物疫苗等对家兔的需求的增加，市场对兔病毒性出血症疫苗的需求量增加了许多，但是用于制备组织灭活疫苗的非免疫兔的供应量却很不稳定，造成传统的组织灭活疫苗的成本不断增加，加之组织灭活疫苗存在散播强毒的潜在危险、批间差异大、产量不高等种种缺点，组织灭活疫苗的广泛应用受到一定的限制。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于克服现有技术存在的不足之处，提供一种用细胞系生产兔瘟疫苗的方法，特别是使用常见易培养的细胞系如RK13、ST、VeroE6、BHK-21、PK-15、IBRS-2等细胞系生产RHD病毒及疫苗的方法。该方法使用培养病毒的细胞系是成熟的商业化的细胞系，具有生产工艺简单稳定、易操作，病毒含量高，批间差异小，质量易控，可显著提高疫苗产量和质量。利用本发明生产的兔瘟疫苗安全性好、免疫力高，对兔瘟强毒攻击具有完全的免疫保护作用。

本发明的主要目的在于提供一种用细胞系生产兔瘟病毒的方法，包括以下步骤：

1)细胞的培养：将细胞系经消化传代，以细胞培养液进行培养，形成生长良好的细胞单层；

2)病毒接种与吸附：将兔瘟病毒接种于上述生长良好的细胞单层，进行病毒吸附；

3)细胞的孵育：换用细胞维持液培养后，加入孵育剂进行细胞的孵育；

4)病毒的繁殖：将上述孵育剂洗去，重新加入细胞维持液培养细胞系以繁殖兔瘟病毒；

5)病毒的收获：收获含有兔瘟病毒的培养液。

优选地，本发明步骤2)中用于接种的兔瘟病毒为使用细胞系生产的兔瘟病毒。

优选地，本发明所述的细胞为：RK13细胞、ST细胞、VeroE6细胞、BHK-21细胞、PK-15细胞、IBRS-2细胞的任意一种或几种。

优选地，本发明所述的细胞系为：RK13细胞。

优选地，本发明所述的孵育剂为D-氨基葡萄糖、干扰素或脂多糖。

优选地，本发明所述的孵育时间为20-40分钟；更优选地，孵育时间为30分钟。

优选地，本发明所述的细胞生长液为含血清的培养液，其中血清含量为1％-7％v/v；更优选地，所述细胞生长液的血清含量为5％-6％，最优地，血清含量为6％。

优选地，本发明所述的细胞维持液为无血清的培养液。

本发明的另一主要目的在于提供如上述的方法制备的兔瘟病毒，其中，使用细胞系生产兔瘟病毒。

本发明的另一主要目的在于：提供一种用细胞系生产兔瘟疫苗的方法：使用上述方法生产的兔瘟病毒，加入灭活剂，灭活后加入兽药学上可接受的疫苗佐剂制备为兔瘟疫苗。

本发明的另一主要目的还在于提供一种用细胞系生产的兔瘟疫苗，其中，使用了细胞系用于生产兔瘟疫苗。