[发明专利]一种兔出血热病毒空衣壳抗原的制备方法

权利要求书

1.一种兔出血热病毒衣壳蛋白VP60优化基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID No.2所示。

2.一种重组杆状病毒，其特征在于，通过使用包含兔出血热病毒衣壳蛋白VP60基因或权利要求1所述优化基因的杆状病毒转移载体DNA与杆状病毒DNA进行重组或转座反应后而获得。

3.根据权利要求2所述的重组杆状病毒，其特征在于，所述重组杆状病毒为包含兔出血热病毒衣壳蛋白VP60基因的重组家蚕核型多角体病毒rBmNPV，或包含权利要求1所述优化基因的重组家蚕核型多角体病毒rBmNPV。

4.一种制备兔出血热病毒衣壳蛋白VP60的昆虫生物反应器，其特征在于，通过使用表达兔出血热病毒衣壳蛋白VP60基因或权利要求1所述优化基因的重组杆状病毒感染昆虫宿主获得。

5.一种兔出血热病毒空衣壳抗原的制备方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

1)构建包含兔出血热病毒衣壳蛋白VP60基因或权利要求1所述优化基因的杆状病毒转移载体；

2)将构建得到的转移表达载体与杆状病毒进行共转染，获得重组杆状病毒；

3)将重组杆状病毒感染昆虫宿主细胞；

4)培养被感染的昆虫宿主，表达相应的兔出血热病毒衣壳抗原颗粒，收获并纯化所表达的抗原。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述杆状病毒选自BmNPV、AcMNPV、ApNPV、HaNPV、HzNPV、LdMNPV、MbMNPV、OpMNPV、SlMNPV、SeMNPV或SpltNPV，优选为家蚕核型多角体病毒BmNPV。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述的宿主选自鳞翅目昆虫，优选为家蚕(Bombyx mori)、野蚕(Bombyx mandarina)、蓖麻蚕(Philosamia cynthia ricim)、樟蚕(Dictyoplca japanica)、樗蚕(Philosamia cynthia pryeri)、柞蚕(Antheraea pernyi)、日本柞蚕(Antheraea yamamai)、野天蚕(Antheraea polyphymus)、苜蓿尺蠖(Atographa califorica)、茶尺蠖(Ectropis obliqua)、甘兰夜蛾(Mamestra brassicae)、斜纹夜蛾(Spodoptera littoralis)、秋粘虫(Spodoptera frugiperda)、粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)、行军虫(Thaumetopoea wilkinsoni)、棉铃虫(Heliothis armigera)、美国棉铃虫(Heliothis zea)、烟青虫(Heliothis assulta)、烟草夜蛾(Heliothis virescens)、东方粘虫(Pseudaletia separata)或舞毒蛾(Lymantria dispar)，更优选为家蚕。

8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，

所述的昆虫宿主是家蚕幼虫和蛹，将重组家蚕杆状病毒感染家蚕细胞或穿刺接种1-5龄的家蚕幼虫或蛹，在感染3-6天后收集家蚕幼虫或蛹的体液或组织匀浆。

9.由权利要求5～8中任一项所述方法制备的兔出血热病毒衣壳蛋白VP60。

10.权利要求9所述兔出血热病毒衣壳蛋白VP60作为兔出血热疫苗的应用。