[发明专利]鸭出血性卵巢炎病毒毒株、灭活疫苗及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种病毒毒株及灭活疫苗，尤其涉及一种鸭出血性卵巢炎病毒毒株、灭活疫苗及其制备方法，属生物工程技术领域。

背景技术

鸭出血性卵巢炎（Duck Hemorrhagic，DH）是新近流行的、急性、高度接触性的一种鸭传染病，其病原为鸭出血性卵巢炎病毒（Duck Hemorrhagic Ovaritis Virus，DHOV），在病毒分类上属于黄病毒科的成员，感染不同日龄鸭，引起鸭卵巢出血，产蛋下降，卵巢、睾丸、输卵管和输精管萎缩，商品肉鸭死淘率增加。

自2010年6月，该病在中国广东、广西、福建、江西、浙江、安徽、江苏、山东、河北和北京等地区发生以来，鸭出血性卵巢炎已经成为近期危害中国养鸭业的主要疫病之一。该病毒主要危害蛋鸭（绍兴鸭、缙云麻鸭、山麻鸭、金定鸭、康贝尔鸭、台湾白改鸭等）、肉种鸭（樱桃谷鸭、北京鸭等）、野鸭种鸭。受染鸭群几乎100%发病，死亡率为5%～30%不等。疾病潜伏期短，发病急，病毒感染鸭群后3～5天可导致鸭群采食量和产蛋量急剧下降，鸭群甚至绝产。约200日龄鸭群的产蛋量恢复到发病前的水平需要30天或者更长的时间，部分大日龄鸭群发病后由于生产性能下降而淘汰。种鸭发病后种蛋的受精率和孵化率降低。商品肉鸭感染后死淘率明显增加。因此，该病给养鸭业带来巨大的经济损失，这使得养鸭业一度陷入绝境。

在病毒分类地位的研究中，曹贞贞、张存等人通过对鸭出血性卵巢炎病毒与黄病毒属恩塔亚病毒群（Ntay a virus group，NTAV群）和乙型脑炎病毒群（Japanese encephalitis virus group，JEV群）中选NS1序列已知的病毒进行序列同源性分析和进化分析，发现该病毒与黄病毒科黄病毒属的巴格扎病毒的遗传距离位于病毒分类学种的水平。苏敬良、万春和、施少华等人的研究也表明分离获得的引起种（蛋）鸭产蛋骤降新病毒的核苷酸序列第9-777位与坦布苏病毒（TMUV）的同源性最高，为88.7％；遗传进化分析表明WR株病毒与坦布苏病毒、圣路易斯脑炎病毒（SLEV）、以色列火鸡脑膜炎病毒（ITV）、恩塔亚病毒（NTAV）具有相似的祖先。

在诊断方面，曹贞贞、万春和、苏敬良、滕巧泱等人报道可以采用临床症状、大体及组织病理变化、PCR扩增和病毒分离等方法确诊该病。但是目前由于没有找到较好疫苗株、大规模和高效价培养病毒的实验室宿主、疫苗评价模型尚未建立，制约着目前疫苗的开发。

因此，目前养鸭业亟需一种免疫效果好的鸭出血性卵巢炎疫苗。 

发明内容

本发明目的之一是提供一种鸭出血性卵巢炎病毒毒株，以便为研制免疫效果好的鸭出血性卵巢炎疫苗奠定基础；

本发明目的之二是提供一种鸭出血性卵巢炎灭活疫苗；

本发明目的之三是提供所述鸭出血性卵巢炎灭活疫苗的制备方法。

本发明所述病毒毒株命名为黄病毒属鸭出血性卵巢炎病毒HB株，采用常规方法接种敏感鸭胚分离获得，保藏号为CCTCC V201122；所述鸭出血性卵巢炎病毒是ssRNA病毒，有囊膜；病毒颗粒大体呈球状，直径40～60nm；所述病毒对外界环境的抵抗力较强，在4℃中存放几周，在-20℃中存放几个月，其感染力均不受影响；所述病毒对乙醚、氯仿敏感；大多数去污剂能将它迅速灭活；在37℃条件下，用0.1％福尔马林熏蒸6h便可把它灭活；所述病毒不能凝集鸡、鸭、火鸡的红细胞，可以凝集1%鸽红血球；所述病毒可在9～13日龄鸭胚尿囊腔、胚绒毛尿囊膜，9～10日龄鸡胚尿囊腔、胚绒毛尿囊膜，6日龄鸡胚卵黄囊，7～8日龄鸭胚卵黄囊中培养，也可在鸭胚成纤维细胞、BHK21细胞和Vero细胞上培养。

一种鸭出血性卵巢炎灭活疫苗，所述灭活疫苗由鸭出血性卵巢炎病毒经接种、收获、灭活、浓缩和乳化而得，所述鸭出血性卵巢炎病毒毒株为黄病毒属鸭出血性卵巢炎病毒HB株，保藏号为CCTCC V201122。

一种制备上述鸭出血性卵巢炎灭活疫苗的方法，它将鸭出血性卵巢炎病毒接种于敏感鸭胚，收获含毒鸭胚组织液，经甲醛溶液灭活、浓缩和乳化制得；具体步骤如下：

a. 接种：将鸭出血性卵巢炎病毒经尿囊腔途径按照10²～10⁴ELD₅₀/枚的剂量接种于10～13日龄敏感鸭胚，37℃孵育；