[发明专利]造血祖细胞的制备方法及其专用培养基

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，尤其涉及一种造血祖细胞的制备方法及其专用培养基。

背景技术

人多能干细胞(人胚胎干细胞和人诱导多能干细胞能)具有在体外无限增殖的能力，并能分化产生各种细胞类型比如血液细胞，这将为治疗血液疾病提供了新的细胞来源。已有的研究报道了人多能干细胞在体外分化产生造血祖细胞的方法，他们主要采用与基质细胞共培养，拟胚体(embryonic body)分化的方式，这些分化方法有诸多的缺点，比如分化方向不定向，分化效率较低，并且分化条件中含有血清和鼠源基质细胞等，这将严重限制此类分化方法产生的造血细胞应用于血液疾病的治疗。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种由人胚胎干细胞或诱导的多潜能干细胞分化制备如下造血祖细胞的培养基。

本发明提供的培养基，由细胞培养液I、细胞培养液II、细胞培养液III和细胞培养液IV组成，

所述细胞培养液I按照如下方法制备：将Activin A、骨形成蛋白-4、碱性成纤维生长因子和培养哺乳动物细胞的基础培养基混合，得到培养液，所述Activin A在所述细胞培养液I中的浓度为1ng/ml-25ng/ml，所述骨形成蛋白-4在所述细胞培养液I中的浓度为1ng/ml-50ng/ml，所述碱性成纤维生长因子在所述细胞培养液I中的浓度为10ng/ml-100ng/ml；

所述细胞培养液II按照如下方法制备：将成血管生长因子、碱性成纤维生长因子、B27添加剂和培养哺乳动物细胞的基础培养基混合，得到培养液，所述成血管生长因子在所述细胞培养液II中的浓度为10ng/ml-100ng/ml，所述碱性成纤维生长因子在所述细胞培养液II中的浓度为10ng/ml-100ng/ml，所述B27添加剂在所述细胞培养液II中的浓度为0.8％-1.2％(体积百分含量)；

所述细胞培养液III按照如下方法制备：将成血管生长因子、碱性成纤维生长因子、B27添加剂、TGF β信号抑制剂和培养哺乳动物细胞的基础培养基混合，得到培养液，所述成血管生长因子在所述细胞培养液III中的浓度为10ng/ml-100ng/ml，所述碱性成纤维生长因子在所述细胞培养液III中的浓度为10ng/ml-100ng/ml，所述TGF β信号抑制剂在所述细胞培养液III中的浓度为2uM-20uM，所述B27添加剂在所述细胞培养液III中的浓度为0.8％-1.2％(体积百分含量)；

所述细胞培养液IV按照如下方法制备：将干细胞因子、血小板生成素、Flt3-ligand、白介素-3、B27添加剂和培养哺乳动物细胞的基础培养基混合，得到培养液，所述干细胞因子在所述细胞培养液IV中的浓度为50ng/ml-200ng/ml，所述血小板生成素在所述细胞培养液IV中的浓度为50ng/ml-200ng/ml，所述Flt3-ligand在所述细胞培养液IV中的浓度为50ng/ml-200ng/ml，所述白介素-3在所述细胞培养液IV中的浓度为50ng/ml-200ng/ml，所述B27添加剂在所述细胞培养液IV中的浓度为0.8％-1.2％(体积百分含量)。

所述细胞培养液I中，所述Activin A在所述细胞培养液I中的浓度为1ng/ml-10ng/ml，所述骨形成蛋白-4在所述细胞培养液I中的浓度为1ng/ml-25ng/ml，所述碱性成纤维生长因子在所述细胞培养液I中的浓度为25ng/ml-50ng/ml；

所述细胞培养液II中，所述成血管生长因子在所述细胞培养液II中的浓度为25ng/ml-50ng/ml，所述碱性成纤维生长因子在所述细胞培养液II中的浓度为25ng/ml-50ng/ml，所述B27添加剂在所述细胞培养液II中的浓度为1％(体积百分含量)；

所述细胞培养液III中，所述成血管生长因子在所述细胞培养液III中的浓度为25ng/ml-50ng/ml，所述碱性成纤维生长因子在所述细胞培养液III中的浓度为25ng/ml-50ng/ml，所述TGF β信号抑制剂在所述细胞培养液III中的浓度为10uM-20uM，所述B27添加剂在所述细胞培养液III中的浓度为1％(体积百分含量)；