[发明专利]雌二醇(E2)定量测定试剂盒及其检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及测定血清的试剂盒及其测试方法，尤其是涉及测定血清中雌二醇(E2)含量的试剂盒及其测试方法。

背景技术

雌二醇(E2)是一种含芳香化A环的18碳类固醇激素，分子量为272.4道尔顿。雌二醇是女性雌激素中生物活性最强的一种甾体激素，主要来源于卵巢、黄体和胎盘，少量由肾上腺分泌。男性主要由睾丸产生。血循环中98％的雌二醇与性激素结合球蛋白(SHBG)结合，少量与白蛋白结合，只有极少量呈游离态的雌二醇具有生理活性。雌二醇的作用是通过与相应的核受体结合，在细胞核水平触发相应的调节反应。其生理效应主要是促使女性生殖器官的生长发育、促使第二性征的发育、对下丘脑-垂体轴的影响等。并对女性月经维持、产卵、排卵、受精、妊娠起着重要作用。男性体内也有少量雌二醇，如果雌激素与睾酮比例失调，男性会出现一些特定的症状，例如腹型肥胖、乳房发育、性欲下降和雄激素低下所引发的其他一些症状。一些治疗药物、慢性酒精中毒和一些长期处于亚健康状态的情况也常会导致雌二醇水平升高。临床上雌二醇水平常用于评价卵巢功能，也可用于诊断女性性早熟和男子女性化乳房发育。对于临床常见的无月经情况，如更年期、怀孕或其他疾病所致的闭经，雌二醇也是很重要的检查之一。在辅助生殖技术中，连续检测雌二醇用于体外受精前确定卵泡生长情况。此外，还用于监测更年期激素替代治疗。在孕期筛查方面，雌二醇与母体AFP、hCG和抑制素A共同用于监测胎儿畸形的一些疾病，如唐氏综合征。从检测角度上来说，目前临床上用于测定E2的方法主要有放免法、ELISA法、化学发光法等。

过去以放免为代表的雌二醇(E2)测定试剂盒受方法学的限制，其灵敏度和抗干扰能力严重不足，存在很大的弊端，已基本上退出市场，目前应用较多的为酶联免疫检测技术和化学发光技术。化学发光技术兴起于上个世纪80年代是继酶联免疫技术和放免技术之后发展起来的新兴技术，由于其高灵敏度、高特异性，同时方法简便、快速，标记结合物稳定，无放射性同位素损伤和污染等特点，在近些年得到了飞速发展。

磁微粒分离酶联免疫检测技术是一种以磁性微粒为固相分离载体，将免疫磁微粒分离技术与酶联免疫检测技术相结合而建立的一种新型免疫检测方法。传统ELISA方法，抗原、抗体的结合反应是在固相(ELISA板反应孔)表面进行的，而磁微粒分离酶联免疫检测方法，抗原、抗体的结合反应也在近似液相的条件下进行，因而反应快速、彻底。与传统ELISA相比具有灵敏度高，检测用时少的优点。

发明内容

本发明需要解决的技术问题在于提供一种雌二醇(E2)定量测定试剂盒及其检测方法，采用该试剂盒进行E2检测具有较高的灵敏度和特异性，和更短的获得检测结果的时间和更简便的操作方式。

本发明提供了一种雌二醇(E2)的定量测定试剂盒，其包含的试剂有E2磁分离试剂，酶反应物，反应增强剂，稀释液，校准品、质控品，清洗液浓缩液以及底物溶液。

所述的磁分离试剂含有标记有抗E2单克隆抗体的磁性微球。

所述的酶反应物是含有碱性磷酸酶标记的E2抗原。

所述的反应增强剂是含有Tris的缓冲液。

所述稀释液是含有BSA溶液。

所述的校准品及质控品是含有一定量的E2抗原的BSA蛋白溶液。

所述清洗液浓缩液是含有TWEEN-20和Proclin-300的缓冲液。

所述的底物溶液为酶促化学发光底物溶液。

本发明雌二醇(E2)的定量测定试剂盒的制备方法，包括下述步骤：

第一步：磁分离试剂的制备过程

一、磁珠缓冲液配制操作步骤，配制1L：

1、称取TRIS 4.58g和NaCl6.81g于1L容器中，称取0.96g TWEEN-20于20ml容器中加适量水使其完全溶解后，倒入上述容器中；

2、用移液器将Proclin-300量取0.2ml于10ml纯化水的烧杯中完全溶解后，倒入上述1L容器中，然后在上述1L容器中加入800ml纯化水，充分搅拌；

3、调节PH计测量其PH值，调PH，控制PH在7.95-8.05之间；

4、称取BSA 3g倒入上述1L容器中；

5、最后定容至1000ml，用0.2um滤器过滤；过滤完后贴好标签于2-8℃冷库贮存。

二、磁分离试剂的制备过程

1、将1.0mg辛二酸二琥珀酰亚胺酯溶于50ul DMSO中，取2mg抗E2单克隆抗体溶于PH 9.5的0.1mol/L PB缓冲液中至总体积为1ml；