[发明专利]一株几丁质降解菌株及其制备几丁寡糖的方法

权利要求书

1.一株产生几丁质酶的菌株，其特征在于，分类命名为Chitiniphilus haikoumangrovensis，保藏编号为CGMCC No.5142。

2.一种利用权利要求1所述菌株制备几丁寡糖的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1)将保藏编号为CGMCC No.5142的菌株接入种子培养基中摇床培养，得到种子液；

步骤2)将所述种子液接入产酶培养基中培养，将培养物离心，取上清，得到含有几丁质酶的酶液；

步骤3)将胶体几丁质、酶液用pH6.5～7.5的K₂HPO₄柠檬酸缓冲液调节pH值至6.5～7.5，调节几丁质酶终浓度为6～10U/L，酶与胶体几丁质比为3000～5000U/g，40～50℃反应后离心，对上清超滤后截留分子量500～1500Da部分，干燥，得到几丁寡糖。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤1)所述种子培养基的成分为葡萄糖10～30g/L，酵母浸膏2～10g/L，蛋白胨2～10g/L，K₂HPO₄0.3～1.0g/L，KH₂PO₄0.15～0.4g/L，NaCl 0.05～0.15g/L，MgSO₄·7H₂O 0.2～0.8g/L，FeSO₄·7H₂O 0.01～0.02g/L，pH7.2～7.4。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤1)所述培养的温度为26～32℃，转速为150～220rpm，时间为24～48小时。

5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤2)所述产酶培养基的成分为胶体几丁质5～15g/L，葡萄糖10～30g/L，酵母浸膏2～10g/L，蛋白胨2～10g/L，K₂HPO₄0.3～1.0g/L，KH₂PO₄0.15～0.4g/L，NaCl 0.05～0.15g/L，MgSO₄·7H₂O 0.2～0.8g/L，FeSO₄·7H₂O0.01～0.02g/L，pH 7.2～7.4。

6.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤2)所述接入的比例为种子液的体积百分比为3％～8％。

7.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤2)所述培养的pH为7.0～7.5，温度为28～32℃，转速为200～350rpm，通气量为1～5L/min/L，时间为1～3天。

8.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤2)所述离心的转速为6000～8000rpm，温度为4～25℃，时间为10～15分钟。

9.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤3)所述胶体几丁质的制备方法为：

步骤a)将几丁质粉末与浓盐酸、浓硫酸或浓磷酸按照质量体积比为1∶30～40的比例混合，搅拌至几丁质全部溶解，得到溶有几丁质的酸液；

步骤b)将所述酸液加入到预冷的水或乙醇溶液中，不断搅拌，静置过夜并离心，去上清，洗涤沉淀至pH值中性；

步骤c)悬浮沉淀使其分散均匀，得到胶体几丁质。

10.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，步骤3)所述反应的时间为6～10小时。