[发明专利]一种枯草芽孢杆菌及利用该细菌制备的微生物菌种剂、微生物肥料以及它们的制备方法

权利要求书

1.一种枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis ），其特征在于它在中国 微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为CGMCC No.50 91。

2.一种枯草芽孢杆菌微生物菌种剂，其特征在于该菌种剂由枯草芽孢杆 菌CGMCC No.5091经培养发酵然后与草炭土混合造粒而得。

3.根据权利要求2所述的枯草芽孢杆菌微生物菌种剂，其特征在于该微生 物菌种剂由如下方法制备而成：

1）将CGMCC No.5091菌株划线接入斜面培养基，即，新1号培养基， 30—38℃培养箱静置黑暗条件下培养36小时；

2）用无菌水冲洗斜面，形成菌悬液；

3）将1体积菌悬液接入20体积的新1号液体培养基中，30—38℃有氧培 养至菌体浓度为10⁸ 个/ml数量级；

4）将步骤3）得到的菌悬液加入到5-10倍体积的新2号培养基中，30— 38℃有氧培养至菌体浓度为10⁸个/ml数量级；

5）将步骤4）得到的菌悬液加入到50-100倍体积的新3号培养基中，3 5-38℃有氧培养至菌体浓度为 10⁸个/ml数量级；

6）将步骤5）得到的菌悬液加入到5-10倍体积的新4号培养基中，35- 38℃培养有氧培养至菌体浓度为10⁹个/ml数量级，停止发酵；然后按 1：2－10的比例与草炭土混合，造粒，低温烘干获得微生物菌种剂；

其中上述培养基为：新1号培养基，即，斜面培养基：蛋白胨 5g/L，氯化钠5g/L，牛肉膏5g/L，琼脂1.5%-2.0%， PH调至6.5-7.8 ，

新1号液体培养基：该培养基不含琼脂，其他成分和含量与新1培养基 相同, PH调至6.5-7.8，

新2号培养基：淀粉5g/L，蔗糖1g/L，酵母浸出汁0.2g/L，蛋白胨5g/ L，牛肉膏5g/L，硫酸铵1g/L，磷酸二氢钾0.5g/L，硫酸镁0.2g/L,氯 化钠5g/L， PH调至6.5-7.8，

新3号培养基：淀粉10g/L，蔗糖5g/L，酵母浸出汁0.1g/L，蛋白胨0. 5g/L，豆饼粉10g/L，硫酸铵1g/L，磷酸二氢钾0.5g/L，氯化钠5g/L，  PH调至6.5-7.8，

新4号培养基：淀粉10g/L，蔗糖2.5g/L，酵母浸出汁0.1g/L，蛋白胨 0.5g/L，豆饼粉5g/L，硫酸铵1g/L，磷酸二氢钾0.5g/L，氯化钠5g/L ， PH调至6.5-7.8。

4.根据权利要求2所述的枯草芽孢杆菌微生物菌种剂，其特征在于该微生 物菌种剂由如下方法制备而成：

 将CGMCC No.5091菌株活化后接入1000ml培养基：淀粉10%，豆饼粉 10%，磷酸氢二钾0.2%，硫酸铵0.1%，硫酸镁0.05%，氯化铁0.001%， 碳酸钙0.01%，酵母膏0.01%，PH7.2-7.4中，三角瓶摇瓶160RPM，30— 38℃培养16小时，然后按1%接种量接种到200L种子发酵罐中，培养基 不变，通气，30—38℃培养16小时，再按10%接种量接到2000L发酵罐 中，培养基不变，30—38℃培养20小时后升温至40—45℃在培养10小 时，待80%菌体产生芽孢后停止发酵；然后按1：2－10的比例与草炭土 混合，造粒，低温烘干获得微生物菌 种剂。

5.一种微生物肥料，其特征在于该肥料由权利要求2－4之一所述的枯草 芽孢杆菌微生物菌种剂与常规化肥和／或有机载体混合而成。

6.根据权利要求5所述的微生物肥料，其中所述的常规化肥为氮肥、磷肥 和／或钾肥，所述的有机载体为鸡粪、粉碎玉米芯和／或煤渣。