[发明专利]用于指导氟脲嘧啶类药物个体化治疗的基因组合

权利要求书

1.一组用于指导氟脲嘧啶类药物个体化治疗的基因组合，其特征在于该基因组合包含：DPYD*2A，DPYD*5A，DPYD*9A，MTHFR，TS，GSTP1基因。

2.根据权利要求1所述的基因组合，其特征在于针对DPYD*2A位点设计的正向引物序列为：CATTGTGACAAATGTTTCCC(SEQ ID No.1)，反向引物序列为：ATCAGCAAAGCAACTGGCA(SEQ ID No.2)；针对DPYD*5A位点设计的正向引物序列为：TCTGCCAAGCCTGAACTAC(SEQ ID No.3)，反向引物序列为：AGAGAAAGTTTTGGTGAGGG(SEQ ID No.4)；针对DPYD*9A位点设计的正向引物序列为：CTGTCTTTAGAGTATCCTGGC(SEQ ID No.5)，反向引物序列为：CACGGCTGTACTTTAATACC(SEQ ID NO.6)；针对MTHFR位点设计的正向引物序列为：AGGACAGTGTGGGAGTTTGG(SEQ ID No.7)，反向引物序列为：GAAAAGCTGCGTGATGATGA(SEQ ID NO.8)；针对TS位点设计的正向引物序列为：GTGGCTCCTGCGTTTCCCCC  (SEQ ID No.9)，反向引物序列为：GGCTCCGAGCCGGCCACAGGCATGGCGCGG(SEQ ID NO.10)；针对GSTP1位点设计的正向引物序列为：CTGCTGTGTGGCAGTCTCTC(SEQ ID No.11)，反向引物序列为：CCGTTACTTGGCTGGTTGAT(SEQ ID NO.12)。

3.如权利要求2所述的引物序列在检测其相应的基因突变中的应用。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于检测方法如下：

4.1提取病人肿瘤组织基因组DNA；

4.2以待测肿瘤组织基因组DNA为模板，用权利要求2所述的扩增引物进行PCR扩增；

4.3PCR扩增产物凝胶电泳分析；

4.4PCR扩增产物测序。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于所述步骤(4.2)中PCR反应体系每20μl组成如下：待测病人肿瘤组织基因组DNA 50～100ng，Taq酶0.125μl，上下游引物(10μM)各1μl，dNTP(2.5mM)2μl，10×PCR缓冲液(含Mg²⁺)2μl，余下为无菌蒸馏水。

6.如权利要求4所述的应用，其特征在于所述步骤(4.2)中用于检测DPYD*2A的PCR扩增反应条件是：95℃预变性2min，随后95℃变性30sec，57℃退火30sec，72℃延伸30sec，进行40个循环，最后72℃延伸7min，4℃保存。

7.如权利要求4所述的应用，其特征在于所述步骤(4.2)中用于检测DPYD*5A的PCR扩增反应条件是：95℃预变性2min，随后95℃变性30sec，57℃退火30sec，72℃延伸30sec，进行40个循环，最后72℃延伸7min，4℃保存。

8.如权利要求4所述的应用，其特征在于所述步骤(4.2)中用于检测DPYD*9A的PCR扩增反应条件是：95℃预变性2min，随后95℃变性30sec，57℃退火30sec，72℃延伸30sec，进行40个循环，最后72℃延伸7min，4℃保存。

9.如权利要求4所述的应用，其特征在于所述步骤(4.2)中用于检测MTHFR的PCR扩增反应条件是：95℃预变性2min，随后95℃变性30sec，58℃退火30sec，72℃延伸30sec，进行40个循环，最后72℃延伸7min，4℃保存。

10.如权利要求4所述的应用，其特征在于所述步骤(4.2)中用于检测TS的PCR扩增反应条件是：95℃预变性2min，随后95℃变性30sec，58℃退火30sec，72℃延伸30sec，进行40个循环，最后72℃延伸7min，4℃保存。

11.如权利要求4所述的应用，其特征在于所述步骤(4.2)中用于检测GSTP1的PCR扩增反应条件是：95℃预变性2min，随后95℃变性30sec，55℃退火30sec，72℃延伸1min，进行40个循环，最后72℃延伸7min，4℃保存。

12.如权利要求4所述的应用，其特征在于所述步骤(4)中测序PCR扩增的反应条件为：95℃预变性4min，随后95℃变性30sec，50℃退火15sec，进行35个循环，最后60℃延伸4min，4℃保存。