[发明专利]一种嗜热链球菌胞外多糖及其制备和检测方法

权利要求书

1.一种嗜热链球菌胞外多糖，其特征在于，所述的胞外多糖(EPS)中，含有76-81%的酸性EPS和12-16%的中性EPS；由四种不同分子量的EPS组成，分别是F1:＞1000kD、F2:1000-100kD、F3:100-10kD和F4＜10kD，分别占EPS总量的68-71%、18-21%、3-6%和2-11%；并且所述的胞外多糖EPS中含有4-4.2%海藻糖、12.6-13%鼠李糖、9-10%半乳糖、0.5-0.7%葡萄糖、30-33%半乳糖胺和21-22%葡萄糖胺的成分。

2.权利要求1所述的胞外多糖，其特征在于所述的胞外多糖是通过将嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus) MN-ZLW-002发酵培养而生产的。

3.一种权利要求2所述胞外多糖的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus) MN-ZLW-002接种到培养基中发酵培养，其中所述的嗜热链球菌(Streptococcus thermophilus) MN-ZLW-002保藏号为CGMCC No.3817；所述的培养基由下述比例的成分组成：葡萄糖5g，酵母粉3g，吐温1g，磷酸氢二钾0.2g，乙酸钠1g，柠檬酸三钠0.2g，硫酸镁0.02g，硫酸锰0.055g，半胱氨酸盐酸盐0.3g，加水至1000mL；

(2) 将发酵液离心，上清液中添加无水乙醇，离心沉淀，之后利用85%酒精清洗，收集沉淀物质，即为胞外多糖。

4.根据权利要求3的生产方法，其特征在于，步骤(1)中，所述发酵的培养温度43℃，培养时间为20-24h，培养的初始pH值6.1。

5.根据权利要求3的生产方法，其特征在于，步骤(2)中，将发酵液离心，离心条件为10000rpm-15000rpm，温度为4℃，时间为5-20min，上清液中添加无水乙醇，添加比例为1:2～3，摇匀，离心沉淀，离心条件为5000rpm-16000rpm，温度为4℃，时间5-20min，之后利用85%酒精清洗3次，收集沉淀物质。

6.一种权利要求1所述胞外多糖的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)提取10-20g样品，分别添加乙酸锌和亚铁氰化钾各5ml，并用蒸馏水定容至100ml，放置30min后，过滤去除蛋白沉淀物；

(2)提取过滤溶液3-6ml放置于离心管，添加6-18ml无水乙醇，摇匀，离心沉淀，之后利用85%酒精清洗，收集糖类物质沉淀物质，用分子量为2000-3500 D的透析袋进行透析，得固体EPS；

(3) 对透析后的胞外多糖进行含量测定。

7.根据权利要求6的检测方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的沉淀蛋白试剂乙酸锌和亚铁氰化钾溶液浓度分别为21.9%和10.6%质量百分比。

8.根据权利要求6的检测方法，其特征在于，步骤(2)中，离心沉淀，离心条件为5000rpm-16000rpm，温度为4℃，时间5-20min，之后利用85%酒精清洗3次，收集沉淀物质。

9.根据权利要求6的检测方法，其特征在于，步骤(3)中，利用苯酚-硫酸法对胞外多糖的含量进行测定。