[发明专利]一种农杆菌转化大豆的方法无效
| 申请号： | 201110262471.6 | 申请日： | 2011-09-07 |
| 公开（公告）号： | CN102304545A | 公开（公告）日： | 2012-01-04 |
| 发明（设计）人： | 李桂兰;乔亚科;王卢平;钟磊;崔姗姗 | 申请（专利权）人： | 河北科技师范学院 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;A01H4/00;A01H5/00 |
| 代理公司： | 秦皇岛市维信专利事务所 13102 | 代理人： | 戴辉 |
| 地址： | 066004 河北*** | 国省代码： | 河北;13 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 杆菌 转化 大豆 方法 | ||
1.一种农杆菌转化大豆的方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）对干燥的大豆种子用氯气法进行消毒12-16h，接种到萌发培养基上萌发4-6d，获得无菌苗，切制大豆子叶节；
（2）用液体培养基，其成分为：1/10 B5+1.7mg/L 6-BA+200μmol/L乙酰丁香酮+400mg/L L-半胱氨酸+1mmol/L二硫苏糖醇+1mmol/L硫代硫酸钠+3mmol/L MES+3%蔗糖，pH值为6.0-7.2，调制活化的农杆菌菌液达到OD600为：0.4-0.6，然后侵染子叶节30-60min；
（3）将上述的子叶节转移到共培养基上，共培养基成分为：1/10 B5+1.7mg/L 6-BA+200μmol/L乙酰丁香酮+400mg/L L-半胱氨酸+1mmol/L二硫苏糖醇+1mmol/L硫代硫酸钠+3mmol/L MES+3%蔗糖+0.8%琼脂，pH值为6.0-7.2，在0-16h/d光照、22-25℃条件下，共培养3-10天；
（4）将上述共培养后的大豆子叶节进行脱菌后，转到不定芽诱导及筛选培养基上进行芽诱导及筛选培养，15天继代一次，直到抗性芽长出，诱导及筛选培养基成分为B5 +1.7mg/L 6-BA +100mg/LKm +250mg/LCarb +250mg/LCef+3%蔗糖+0.8%琼脂，pH=5.8；
（5）将上述的抗性芽转移到芽伸长培养基上，芽伸长培养基成分为：B5 + 1.0mg/LGA3 + 100mg/LKm + 250mg/LCarb + 250mg/LCef +3%蔗糖+0.8%琼脂，pH=5.8；
（6）抗性芽生长到4-6cm后，转移到生根培养基上，生根培养基成分为1/2MS+1.0mg/L IBA+0.2mg/L NAA+250mg/LCef+3%蔗糖+0.8%琼脂，pH=5.8；
（7）当根长达到4-6cm后，将苗移栽到营养土中，将苗用薄膜覆盖，待新叶长出后去掉薄膜，获得转化植株。
2.根据权利要求1所述的农杆菌转化大豆的方法，其特征在于，所述的共培养基的pH值，优选的pH范围为6.0-7.2，最佳 pH值为6.6。
3.根据权利要求1所述的农杆菌转化大豆的方法，其特征在于，所述的共培养优选7-10天；最佳为10天。
4.根据权利要求1所述的农杆菌转化大豆的方法，其特征在于，所述的共培养期间的光照时间在优选12-16h/d；最佳为16h/d。
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