[发明专利]一种从单叶格里风中制备格里风素的方法

说明书

技术领域

本发明属于植物有效成分提取分离技术领域，涉及一种从单叶格里风中制备格里风素的方法。

背景技术

格里风素（Griffonin）分子式为C₁₄H₁₉NO₈，分子量为329.31，是从豆科植物单叶格里风Griffonia simplicifolia Baill.、毛茛科植物天葵Semiaquilegia adoxoides(DC.)Makino等植物中分离得到的一种氰苷类化合物，具有提高红细胞钠容量，作为抗镰状细胞药物治疗镰状细胞疾病危象，并且具有抗肿瘤促进作用，在Raji细胞中，对TPA有道的EBV-EA活化有强的抗肿瘤促进作用。目前格里风素的提取工艺研究报道甚少，尚未发现制备高含量格里风素的方法报道。

发明内容

本发明的目的在提供一种从单叶格里风中提取制备格里风素的方法，以得到高纯度的格里风素。

为实现上述目的，本发明的技术方案如下：

一种从单叶格里风中制备格里风素的方法，其特征在于包括以下步骤：取单叶格里风根粉碎，用40-95%乙醇回流或恒温浸渍提取，反复提取2-4次，合并提取液后进行浓缩、干燥得粗提物A；将粗提物A与经过预处理的14-30目粗聚酰胺树脂按重量比1-3:1混匀，装入层析柱，然后用50-75%乙醇洗脱，洗脱流速为0.2-0.5BV/h，收集洗脱液，浓缩，低温干燥，得到格里风素粗提物B；将格里风素粗提物B与经过预处理的50-150目细聚酰胺树脂按重量比2-5:1混匀，装入层析柱，然后用正丁醇-乙醇-水（1:6:3）混合溶液进行洗脱，洗脱流速为0.03-0.1BV/h，收集洗脱液，浓缩，低温干燥得格里风素粗品；将粗品加入甲醇溶解，再经制备液相进一步分离纯化得到纯度98%以上的格里风素成品。

所述粗提取物A与经过预处理的粗聚酰胺树脂混匀：先将粗提物A溶于甲醇制成溶液，在70-85℃条件下边加溶液边搅拌粗聚酰胺树脂直至混合均匀。

所述格里风素粗提物B与经过预处理的细聚酰胺树脂混匀：先将粗提物A溶于甲醇制成溶液，在70-85℃条件下边加溶液边搅拌细聚酰胺树脂直至混合均匀。

所述制备液相填料为C18，柱规格为30mm×250mm，检测波长：262nm，流动相为甲醇-水或乙腈-水，所述流动相甲醇的体积百分比为25-50%，所述流动相乙腈的体积百分比为15-30%。

本发明方法所用溶剂毒性较小，环保，经济效益好，能进行大规模生产，且工序简单，易于控制，分离效率高，产品纯度高。目前国内关于格里风素的分离纯化研究报道较少，聚酰胺树脂柱层析与高效制备液相色谱结合用于格里风素的分离纯化也属首次，本发明方法为格里风素的进一步开发利用提供了药理原料和理论支持。

具体实施方式

下面将结合具体实施例对本发明作进一步说明。

实施例1：

取单叶格里风根粉碎，加50%乙醇在70℃条件下恒温浸渍提取4小时，过滤，反复提取4次，合并滤液，浓缩、干燥得粗提取物A，将经过预处理的14-30目粗聚酰胺树脂装柱，粗提取物A溶于甲醇制成溶液，在70-85℃条件下边加溶液边搅拌粗聚酰胺树脂直至混合均匀。粗提物A与粗聚酰胺树脂重量比为1.5:1，拌样粗聚酰胺树脂上柱，然后用50%乙醇洗脱，洗脱流速为0.2BV/h，收集洗脱液，浓缩，低温干燥，得到格里风素粗提物B，将经过预处理的50-100目细聚酰胺树脂装柱，格里风素粗提物B溶于甲醇制成溶液，在70-85℃条件下边加溶液边搅拌细聚酰胺树脂直至混合均匀。格里风素粗提物B与细聚酰胺树脂重量比为2:1，拌样细聚酰胺树脂上柱，然后用正丁醇-乙醇-水（1:6:3）混合溶液洗脱，洗脱流速为0.05BV/h，收集洗脱液，浓缩，低温干燥得格里风素粗品；将粗品加入甲醇溶解，再经制备高效液相分离得到含量98.5%的格里风素。所述制备高效液相填料为C18，柱规格为30mm×250mm，检测波长：262nm，流动相为甲醇-水（30:70）。

实施例2：