[发明专利]基孔肯雅病毒病毒样颗粒的制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及病毒学、分子生物技术领域，具体地说涉及基孔肯雅病毒病毒病毒样颗粒的制备方法和应用。

背景技术

基孔肯雅病毒(Chikungunya virus，CHIKV)病毒经伊蚊叮咬传播，引起以发热、关节疼痛等为主要特征的自限性传染性疾病基孔肯雅热(Chikungunya fever，CHIK)。1952年在坦桑尼亚发生暴发流行中首次分离CHIKV，亚洲地区于1958年在泰国首次分离CHIKV。随后在非洲、亚洲包括印度次大陆发生了多次CHIK的暴发流行，累计报告病例超过800万。据世界卫生组织报告，全球有37个国家和地区呈地方性流行或具有潜在地方性流行风险。

CHIKV属于披膜病毒科甲病毒属的单股正链RNA病毒，基因组约含有11-12k核苷酸，基因排列顺序为5′-NCR-NS1-NS2-NS3-NS4-C-E3-E2-6K-E1-3′，共编码5个结构蛋白和4个非结构蛋白。病毒颗粒为球形，直径约为60-70nm。病毒糖蛋白E1和E2镶嵌在由脂质双层膜构成的病毒包膜上，介导病毒吸附宿主细胞并与细胞膜融合，病毒进入靶细胞是通过依赖Eps15的内吞作用实现的。根据抗原特性分类，该病毒属于Semliki森林病毒(SFV)群与o′nyong-nyong病毒基因组同源性高，存在血清学交叉反应。目前流行的CHIKV分为3个基因型，即西非型、亚洲型和东中南非洲型(ECSA)，每一基因型的病毒一般在相应的地理区域呈地方性流行，直到2005-2006年ECSA型病毒传入亚洲，引发了印度洋群岛、印度及东南亚地区CHIK大暴发。生物信息学分析显示CHIKV是由存在于非洲大陆的共同祖先进化而来，大约70-90年前传到亚洲。

CHIKV的致病机理知之甚少，病毒能够感染包括表皮细胞、内皮细胞、成纤维细胞和巨噬细胞等，病毒复制可诱发细胞病变和凋亡[11]，诱导细胞凋亡也可能是病毒规避宿主免疫系统的机制。对临床发病数周后患者肌肉组织活检发现肌卫星细胞中存在病毒抗原，显示CHIKV可能长期存在于感染者体内。病毒感染方式影响宿主的免疫应答，经蚊叮咬感染与经注射感染病毒诱发的免疫反应显著不同。在急性期，血清中病毒载量决定促炎症细胞因子的特异性表达模式，细胞和组织破坏相关的临床症状可能和细胞因子的异常表达及细胞凋亡有关，与疾病的严重程度相关。在慢性期，IL-6和粒细胞巨噬细胞集落刺激因子水平和持续性关节病相关，同时CD8+T淋巴细胞缺失或失活导致细胞免疫缺陷可能是造成疾病迁延不愈的机制之一。抗体介导的免疫增强机制也可能存在于CHIKV感染过程。

人感染CHIKV后可获得终身免疫，诱导机体产生中和抗体，抑制病毒胞外传播。基于病毒膜蛋白的病毒样颗粒和DNA疫苗能够诱导非人灵长类有效的体液和细胞免疫，诱导产生的抗血清能够保护免疫缺陷动物免受病毒感染。

CHIKV的自然宿主为人和灵长类动物，主要传播媒介为埃及伊蚊、白纹伊蚊、非洲伊蚊和带叉-泰氏伊蚊，不同蚊种在传播中的重要性不同，埃及伊蚊为家栖蚊种，传播基孔肯雅病毒能力最强。在非洲，丛林型疫源地在病毒循环中起重要作用，受感染的灵长类和其他野生动物是主要传染源，病毒主要以灵长类-蚊-灵长类的方式循环，病毒流行可长期循环存在，主要流行于雨季，旱季时减轻。在亚洲CHIKV主要以城市型模式流行，病人和隐性感染者为主要传染源，病毒主要以人-蚊-人的方式循环，流行以不定期的暴发为主。

人群普遍易感，在易感人群中病毒感染率可高达40-85％，隐性感染患者所占感染者的比例还不清楚，2006年印度报告130多万CHIK病例，但无症状感染的比例很低，并首次出现死亡病例。虽然直接由CHIKV引起死亡的病例很少，但是在CHIK流行期人群月报告死亡率明显高于非流行期，提示基孔肯亚热可能增加其他疾病的病死率。CHIK流行造成当地严重的公共卫生负担，在印度洋地区发生的大暴发中患者平均误工时间为35天，多于60％患者发病急性期过后有约18个月的持续性关节痛。除了经输血传播外，没有人传人的报道，孕妇围产期后期感染病毒可发生母婴传播引起新生儿感染，但没有经母乳传播病毒的证据。在蚊中病毒可通过交配由雄蚊传播给雌蚊，也可以经卵传播给幼蚊。在登革热和基孔肯亚热共同流行地区常有人同时感染CHIKV和登革病毒。