[发明专利]中国鸡痘病毒282E4弱毒株全基因组序列及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及中国鸡痘病毒282E4弱毒株全基因组序列及其应用。

背景技术

鸡痘病毒(fowlpox virus，FPV)属痘病毒科禽痘病毒属，成熟病毒粒子呈砖型或椭球型，大小为280nm×330nm，表面呈桑椹样，是迄今为止所发现的动物病毒中体积最大、结构最复杂的病毒之一。

FPV作为痘病毒中禽痘病毒的代表，与其他痘病毒相比，基因组更为庞大，能容纳更多外源基因而不丧失其感染性；外源蛋白在宿主细胞内能被忠实表达，并进行必要的糖基化、羧基化等修饰；表达产物具有良好的免疫原性，可诱导机体产生长效的细胞免疫和体液免疫；严格的胞浆内复制，避免了病毒自身的基因及其所携带的外源基因重组入宿主细胞染色体的可能，消除了重组鸡痘病毒应用后的遗传威胁；宿主范围较窄，只能涵盖禽类，而感染范围较宽，虽只表现为一过性感染(又称流产性感染)，却几乎涉及所有哺乳动物细胞，即有效感染哺乳动物细胞后表达早期基因、部分晚期基因并进行DNA的复制，但不能发育为具有感染性的成熟病毒粒子；作为预防或治疗性生物制剂的安全性和有效性已被大量的动物和人体试验证明。因此，FPV不仅能用于研发禽类基因工程活载体疫苗，而且可作为非复制型活载体用于包括人类在内的哺乳动物疾病的防治，是当前研究的一个热点。

我国FPV282E4弱毒株可作为预防鸡痘的安全、有效疫苗，以其为载体制备的禽类和哺乳动物的基因工程活载体疫苗有着良好的应用前景，截至目前为止，还没有中国FPV282E4弱毒株全基因组序列的报道，从而限制了对该毒株的进一步研究和应用。

发明内容

本发明的目的在于提供中国鸡痘病毒282E4弱毒株全基因组序列及其应用。

为了实现本发明目的，本发明的中国鸡痘病毒282E4弱毒株全基因组序列，其全基因组序列如SEQ ID No.1所示，全长共308,829个核苷酸，GC含量28.18％，含有313个预测的ORF。

本发明的中国鸡痘病毒282E4弱毒株全基因组序列可用于鸡痘病毒功能基因组学、新型病毒载体构建、新型鸡痘病毒预防性疫苗和快速诊断检测试剂，以及鸡痘病毒遗传变异规律及其致病、感染与免疫机制等研究。

本发明提供一种鸡痘病毒282E4载体穿梭质粒，其包括：重组臂TKL和TKR、双向启动子PE/L、目的蛋白表达盒、抗性标记基因和复制起点ori，在所述双向启动子PE/L上下游分别具有多克隆位点MCSL和MCSR。

前述的穿梭质粒，目的蛋白优选为报告蛋白，如绿色荧光蛋白(GreenFluorescentProtein，GFP)，在所述报告蛋白表达盒两端均具有loxp序列。此外，根据需要，也可将β-半乳糖苷酶(LacZ)、β-葡糖苷酸酶(GUS)、荧光素酶(LUC)、氯霉素乙酰转移酶(Cat)等作为报告蛋白。另外，还可连入需要表达的目的蛋白，如用作疫苗的抗原、中和病毒的抗体以及细胞因子等。

前述的穿梭质粒，所述目的蛋白表达盒的启动子为PL。

前述的穿梭质粒，所述抗性标记基因为AMP。

前述的穿梭质粒，重组臂TKL的核苷酸序列如SEQ ID No.2、SEQ ID No.3或SEQ ID No.4所示；重组臂TKR的核苷酸序列如SEQ IDNo.5或SEQ IDNo.6所示。

本发明还提供前述穿梭质粒重组得到的重组表达载体。

本发明还提供前含有前述穿梭质粒或前述重组表达载体的宿主。

本发明进一步提供前述穿梭质粒在制备重组鸡痘病毒活载体疫苗中的应用。