[发明专利]一种肝素钠平衡提取方法

权利要求书

1.一种肝素钠平衡提取方法，具体步骤如下：

A采用常规酶解法在酶解罐中混合猪小肠粘膜、盐、碱、蛋白酶和水；B对混合后的液体分别加入三种频率的超声波进行酶解，其频率分别为28KHz、40KHz、68KH，工作时间分别为20分钟、30分钟、10分钟，制得猪小肠酶解液；C采用常规法加热酶解液使蛋白酶失活蛋白变性；D采用带有10μm-50μm的过滤装置过滤杂质并采用带有恒温循环装置的层析设备进行吸附；E采用常规法洗脱树脂；F采用常规法沉淀肝素钠；G采用常规法纯化肝素钠；H最后采用常规法干燥得到肝素钠。

2.根据权利要求1所述的一种肝素钠平衡提取方法，其特征在于：所述步骤B、D中采用的三种超声波特有的频率对应整个酶解过程，和一种10μm-50μm过滤装置、恒温、循环、密封、层析的方法。

3.根据权利要求2所述的一种肝素钠平衡提取方法，其特征包括如下步骤：

A混合酶解液：采用传统酶水解工艺，用健康猪小肠粘膜为原料，加入水、蛋白酶、肠衣盐、氢氧化钠，其比例分别为(本专利按份来计算)5份肠粘膜加：25L水：25克蛋白酶：150克肠衣盐，一起投入反应罐中，搅拌均匀后，用2mol浓度氢氧化钠调节酶解液PH至8.0-9.0。

B超声波工作过程：在酶解液中温度达到40度时分别加入28KHz、40KHz、68KHz超声波，其工作时间分别为20分钟、30分钟、10分钟，功率分别为500W、400W、500W。超声波工作结束后开始升温至55-60℃，恒温搅拌酶解2H。

C蛋白酶失活过程：将酶解液快速加温至85-90℃，保温10-30分钟，开始过滤。

D过滤吸附：待蛋白酶失活过程结束，开始过滤，先用100-120目滤网过滤杂质，收集滤液。滤液再用10μm-50μm的过滤装置过滤，过滤后的液体变清澈，将酶解液降温后，通过自循环装置，把酶解液循环通过预装好树脂的层析柱，循环为封闭式循环，隔绝了与空气的接触减少氧化，柱高为树脂高度的3倍，循环8H，同时保持温度60℃，压力1.025MPa。

E洗脱：将吸附后的树脂用15％-20％氯化钠溶液(树脂量的1倍)搅拌洗脱2-4H 2次，收集洗脱液，然后再用20％氯化钠溶液(树脂量的1倍)洗脱1次，收集洗脱液。

F肝素钠沉淀：将步骤E中洗脱液合并，加入80％-95％乙醇搅拌，直到沉淀液乙醇浓度达到40-50度，停止搅拌，静置12H，将上部酒精回收待下次使用，收集下部肝素钠沉淀物。

G肝素钠纯化：将步骤F所得肝素钠沉淀用3％氯化钠溶液溶解，用200-300目滤网过滤，除去杂质，在加入85％-95％乙醇搅拌，直到溶液浓度达到45％-50％，静置沉淀8H，回收上部酒精，收集下部肝素钠沉淀，然后加入85％-95％乙醇脱水，收集肝素钠沉淀。

H烘干：将收集的肝素钠沉淀至于鼓风干燥箱中风干，至半干时，加入蒙脱石干燥，可得肝素钠。