[发明专利]提取大豆油脂和蛋白的微生物发酵酶解法

权利要求书

1.一种提取大豆油脂和蛋白的微生物发酵酶解法，包括以下步骤：(1)将大豆进行预处理；(2)将活化后的微生物菌种接入到液体发酵培养基中进行发酵产酶；(3)将发酵培养液离心，得到上清液；上清液与水混合得到混合液；将预处理粉碎后的大豆粉接入到混合液中进行酶解；(4)酶解完全后，离心得到乳状液，水解液和残渣；将乳状液破乳，获得游离油；(5)调节水解液pH值，离心，清洗沉淀后再离心，将沉淀用水溶解后调节pH值，干燥，获得大豆分离蛋白；其中，按重量百分比计，步骤(2)中所述的液体发酵培养基的组成为：0.1-0.9％低温脱脂豆粕，1.0-2.0％葡萄糖，0.01-0.09％KH₂PO₄，0.3-1％吐温80；pH值为7-10.5。

2.按照权利要求1所述的微生物发酵酶解法，其特征在于，步骤(2)所述的液体发酵培养基的组成为：按重量百分比计，0.3-0.7％低温脱脂豆粕，1.3-1.7％葡萄糖，0.03-0.07％KH₂PO₄，0.3-1％吐温80，pH值为7-10.5；进一步优选为：0.57％低温脱脂豆粕，1.48％葡萄糖，0.05％KH₂PO₄，0.5％吐温80；pH值为9。

3.按照权利要求1所述的微生物发酵酶解法，其特征在于，步骤(1)中所述的大豆预处理方式为：磨碎、超声波处理或挤压膨化；优选为挤压膨化，其中，所述挤压膨化优选在以下条件下进行：物料含水率为13％-17％，挤压膨化机套筒温度为85-110℃，螺杆转速95-115r/min。

4.按照权利要求1所述的微生物发酵酶解法，其特征在于：步骤(2)中所述的微生物菌种为枯草芽孢杆菌(Bacillus Subtilis)菌种；步骤(2)中所述的发酵条件为：按体积比计，将4-7％微生物种子液接入到液体发酵培养基中，其中液体发酵培养基与发酵瓶的体积比为1∶5，33-39℃下120-200r/min振荡培养30-54小时；优选的，34-38℃下150-170r/min振荡培养32-50小时；更优选的35℃下160r/min振荡培养42小时。

5.按照权利要求1所述的微生物发酵酶解法，其特征在于：步骤(3)中将发酵培养液在4℃条件下以5000转恒温离心20分钟，将上清液与水混合，在碱性酶活为2000-3000u/g全脂豆粉，中性蛋白酶活力为1500-2000u/g全脂豆粉的条件下，接入膨化全脂豆粉进行酶解；其中膨化全脂豆粉为过70-120目筛的膨化全脂豆粉。

6.按照权利要求1所述的微生物发酵酶解法，其特征在于：步骤(3)中所述的酶解温度为50-60℃，优选为55℃；所述的酶解时间为6-10小时，优选为6小时。

7.按照权利要求1所述的微生物发酵酶解法，其特征在于：步骤(3)中全脂豆粉与混合液的重量比例为1∶6-10，优选为1∶7。 

8.按照权利要求1所述的微生物发酵酶解法，其特征在于：步骤(3)中将酶解液的pH值调至为8-11，优选为10。

9.按照权利要求1所述的微生物发酵酶解法，其特征在于：步骤(4)中将乳状液在以下条件下进行破乳：在40-65℃的温度下将乳状液pH调至3-5，作用30-60分钟；优选的，在50℃的温度下将乳状液pH调至4或4.5，作用30分钟，在3000-5000r/min转速下离心15-30min。

10.按照权利要求1所述的微生物发酵酶解法，其特征在于：步骤(4)中将所得到的残渣进行如下处理：将残渣用水洗后离心分别得到乳化层、水洗液和残渣；合并乳状液与乳化层，破乳，获得游离油；步骤(5)中调节水解液pH值至4.5，离心后沉淀用水清洗，再次离心，将沉淀用水溶解后调节pH值至7，喷雾干燥或冷冻干燥，获得大豆分离蛋白。