[发明专利]一种MEK1基因突变检测特异性引物和液相芯片

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学领域，涉及医学和生物技术，具体的是涉及一种MEK1基因突变检测特异性引物和液相芯片。

背景技术

MEK1基因参与大量的生命过程并在胚胎发育过程中扮演重要角色，有研究表明，MEK1基因突变高频率出现在肿瘤中，而研究热点一般集中在Q56P、K57N、D67N和P124L等4个位点。

目前，对MEK1基因突变进行检测和分析的方法很少，主要有直接测序法和PCR-RFLP分析法，其中最常用的方法有PCR-RFLP分析法。PCR-RFLP法是基于基因突变造成的限制性内切酶识别位点的改变，如位点丢失或产生新位点，通过PCR扩增某一特定片段，再用限制性内切酶酶切扩增产物，电泳观察片段的大小，这种方法用于检测酶切位点改变的基因突变，可直接判断基因型，但该法不能用于没有产生新酶切位点的基因突变检测。再次，以上这些方法都存在着检测通量的局限性，每次只能检测一种突变类型，不能满足实际应用的需要。

发明内容

本发明的目的之一是提供MEK1基因突变检测液相芯片，该液相芯片可用单项或者并行于检测MEK1基因四种常见基因型Q56P、K57N、D67N和P124L的野生型和突变型。

一种MEK1基因突变检测液相芯片，其特征是，包括有：

(A).针对MEK1基因不同突变位点分别设计的野生型和突变型的ASPE引物：每种ASPE引物由5’端的tag序列和3’端针对目的基因突变位点的特异性引物序列组成，所述特异性引物序列为：针对Q56P位点的SEQ ID NO.9及SEQ ID NO.10；针对K57N位点的SEQ ID NO.11及SEQ ID NO.12；针对D67N位点的SEQ ID NO.13及SEQ ID NO.14；和/或针对P124L位点的SEQ ID NO.15及SEQ ID NO.16；所述tag序列选自SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.8；

(B).有anti-tag序列包被的、具有不同颜色编码的微球，所述anti-tag序列与微球连接中间还设有间隔臂序列；所述anti-tag序列选自SEQ ID NO.17～SEQ ID NO.24，且所述anti-tag序列能相应地与(A)中所选的tag序列互补配对；

(C).用于扩增出需要检测的、具有相应突变位点的目标序列的引物。

优选地，所述扩增引物为：针对Q56P、K57N、D67N位点的SEQ ID NO.25和SEQ ID NO.26；和/或针对P124L位点的SEQ ID NO.27和SEQ ID NO.28。

优选地，所述ASPE引物为：针对Q56P位点的由SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.9组成的序列及由SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.10组成的序列；针对K57N位点的由SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.11组成的序列及由SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.12组成的序列；针对D67N位点的由SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.13组成的序列及由SEQ ID NO.6和SEQ ID NO.14组成的序列；和/或针对P124L位点的由SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.15组成的序列及由SEQ ID NO.8和SEQ ID NO.16组成的序列。

本发明的另一目的是提供用于MEK1基因突变检测的特异性引物。

实现上述目的的技术方案如下：

用于MEK1基因突变检测的特异性引物，其为：针对Q56P位点的SEQ ID NO.9及SEQ ID NO.10；针对K57N位点的SEQ ID NO.11及SEQ ID NO.12；针对D67N位点的SEQ ID NO.13及SEQ ID NO.14；和/或针对P124L位点的SEQ ID NO.15及SEQ ID NO.16。

本发明的主要优点在于：

1.本发明所提供的检测方法与测序法的吻合率高达100％，且检测所需要的时间远远低于常用的测序技术，特别符合实际应用需要。所制备的MEK1基因突变检测液相芯片具有非常好的信号-噪声比，并且所设计的探针以及anti-tag序列之间基本上不存在交叉反应，tag标签序列、anti-tag标签序列的选取以及tag标签序列与具体ASPE引物的结合，能够避免交叉反应，实现多个突变位点的并行检测。