[发明专利]基于磁珠提取大豆及其深加工产品核酸的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种采用磁珠从植物及其植物源加工食品中提取并纯化核酸的领域。磁珠通过修饰之后可以与核酸特异性结合而从复杂的样品中进行分离纯化，通过洗脱使提取的核酸释放到溶液中，实现核酸的快速分离提取，涉及核酸分离方法、试剂盒及在转基因检测中的应用。 

背景技术

核酸的提取与纯化技术是生物化学与分子生物学的一项基本技术。随着分子生物学技术广泛应用于生物学，医学，食品检测及其相关领域，核酸的提取与纯化技术也得到了进一步的发展。 

核酸在细胞中总是与各种蛋白质结合在一起，核酸提取主要是将核酸与蛋白、多糖、脂肪、酚类等生物分子物质分离。大多数方法一般都包括细胞裂解，去除与核酸结合的物质，沉淀核酸，去除盐类、有机溶剂等杂质，纯化核酸等步骤。传统方法主要是CTAB法，离心柱法，试剂盒法。由于传统方法步骤繁琐，耗时，并且用有机溶剂，污染较大，易导致核酸降解；试剂盒法存在价格昂贵等缺点。 

本发明采用磁珠核酸提取方法，在操作过程中不含氯仿，苯酚等毒性大的有机溶剂，提取纯化的核酸质量好，满足核酸后续研究的需求，提取步骤更为简单，不需要多次离心，易于实现自动化，这些优点及其特点使其具有代替其它方法的趋势。 

发明内容

本发明目的是利用磁性微球从大豆及其深加工产品中快速提取基因组DNA，以进行后续转基因检测。 

本发明以磁性微球为固相载体纯化核酸的方法包括以下步骤： 

(1)细胞裂解：使用裂解液将样品细胞裂解，以释放其中的核酸，并离心取其中的上清液。 

(2)核酸纯化：将裂解上清液与binding buffer混合，再加入二氧化硅壳磁性微球。通过binding buffer对于DNA的排挤作用，使得磁性微球特异性地与DNA结合。磁分离之后弃去上清液，磁珠-DNA复合物得以保留，其余杂质则除去。之后再用70％乙醇洗涤，除去残留杂质。 

(3)核酸洗脱：在磁珠-DNA复合物中加入TE溶液，DNA即可洗脱下来，以供后续生物检测之用。 

本发明的优点： 

(1)不需使用有毒的有机溶剂，绿色环保，有利于操作人员的健康。 

(2)操作简便，大大减少核酸纯化时间，操作时间小于2h，有效防止长时间操作造成的核酸降解。 

(3)使用范围广泛，不仅适用于含有多酚、多糖的植物鲜品，还适用于含有较多PCR抑制剂、DNA片段严重断裂的深加工食品。 

(4)具有自动化升级的潜力，可与磁珠分离设备配合，实现核酸提取的规模化、集成化。 

附图说明

附图1.为2％的琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物。泳道左边为大豆内源Lectin基因产物，中间为外源35S基因产物，右边为外源Nos基因产物。M：2000bp marker，1-7号泳道检测样品依次为：阳性对照、大豆粉、豆腐、豆奶粉、豆腐、豆浆和空白对照。 

附图2.为大豆内源Lectin基因的荧光定量PCR的检测 

附图3.为大豆外源35S基因的荧光定量PCR的检测 

附图4.为大豆外源NOS基因的荧光定量PCR的检测 

具体实施方式

实施例1：以磁珠纯化大豆及其深加工产品的核酸。 

具体实施方式： 

以大豆及其大豆加工食品为例。 

1.称取一定量的样品于EP离心管中。 

2.加入适量的细胞裂解液，于65℃中30min，中间混匀3-4次。 

3.12000rpm离心10min 

4.取适量上清液(注意不要吸到杂质颗粒)于已经用binding buffer分散好的二氧化硅-磁球中，形成DNA-二氧化硅-磁球复合物。 

5.充分混匀后静置10min。 

6.磁分离，弃去混合溶液。 

7.重复4-6。 

8.用适量的70％乙醇溶液分散，洗去杂质。 

9.磁分离，弃去液体。 

10.重复8-9。 

11.室温下充分晾干。 

12.加入一定量的TE洗脱DNA，使DNA从DNA-二氧化硅-磁球复合物脱离下来。 

13.磁分离，吸取液体，即得到DNA溶液，存放于4℃冰箱中备用。 

实施例2：以磁性微球纯化大豆及其制品的DNA和荧光PCR检测转基因成分。