[发明专利]转基因抗虫水稻土壤环境安全的评价方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种转基因抗虫水稻土壤环境安全的评价方法。

背景技术

近年来，国内外在转基因作物的培育上已经取得了较大进展，我国在转基因水稻，特别是抗虫水稻新品系的转育方面居世界先进水平，已经进入了实质性环境释放试验和生产性试验阶段，其大规模产业化应用蓄势待发，很有可能成为世界上率先商品化种植转基因水稻的国家之一。与传统的害虫防治方法相比，转Bt基因水稻抗虫技术不仅具有选择性强、使用安全、投资少、见效快等优点，而且对植物的保护作用具有连续性和全面性，是解决当前粮食问题的首选方法之一。然而，由于转基因水稻具有潜在的生态风险性、可能危及人类健康和引发环境污染等问题，已引起了世界性的“生物安全”论战。就环境安全性而言，转基因抗虫水稻大规模生产后，其对农田生态系统和自然生态系统可能造成的负面影响是多方面的。如：1)外源基因可能通过“基因漂移”和基因水平转移方式，向非转基因生物逃逸导致遗传多样性、物种多样性、生态系统多样性变化等；2)外源基因表达产物在环境中形成积累，可能导致靶标生物对表达蛋白选择压的增加进而产生抗性或对非靶标生物具有毒害作用；3)可能造成地球化学过程和土壤养分循环的改变，等等。随着转基因水稻种植面积的日益扩大，国际上呼吁人类谨慎对待转基因作物和食品的声音亦有增无减，应严谨和科学地开展转基因水稻的环境安全性的评价研究。因此，有关抗虫转Bt基因水稻的环境安全性研究显得尤为迫切和重要，已成为国内外新的研究热点。

土壤是农业生产的载体，转基因作物种植与土壤生态系统间将发生一系列交互作用，客观评价转基因作物对土壤环境的影响是转基因作物研究和发展的重要基础和现实问题。有关转基因水稻的土壤环境安全性评价已成为转基因作物环境安全性评价体系中不可或缺的一环，引起了国内外的高度重视。稻田土壤与水体中生长着种类繁多的土壤动物，它们在稻田生态系统平衡与水稻生长发育等方面扮演着众多独特而重要的角色。稻田中土壤动物的种类繁多、组成极其丰富，特别是土壤原生动物、线虫类、蚯蚓类对土壤中动植物残体分解、污染物降解、土壤理化性质的进化、土壤发育与物质迁移及能量转化等物理、化学过程方面都有重要作用，是农业生态系统的关键环节。土壤动物通过食物链(植物残体、微生物、腐殖质和水等)不断从环境中吸收富集必要的营养和矿质元素，将其转化为土壤有效成分。因此，转基因作物的外源基因及其表达蛋白对土壤动物的影响广受国内外关注。同时，土壤动物还是表征土壤质量变化的敏感生物指标之一，适合用于土壤生态风险评价。转基因水稻的安全性问题是全国关注的焦点，它对土壤动物的影响可通过两个方面进行评价，一个是对土壤动物的种群生态是否会产生影响，另一方面需检测转基因水稻对土壤动物的DNA是否会产生影响。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种步骤简便、结论准确的转基因抗虫水稻土壤环境安全的评价方法。

为了解决上述技术问题，本发明提供一种转基因抗虫水稻土壤环境安全的评价方法，包括以下步骤：

1)、转基因抗虫水稻水浸泡液和和非转基因水稻水浸泡液的制备：

在转基因抗虫水稻秸梗中按照1g/20～30ml的料液比加入蒸馏水，于25～27℃浸泡3.5～14天，过滤，得转基因抗虫水稻水浸泡液；

在非转基因水稻秸梗中按照上述相同的料液比加入蒸馏水，于上述相同的温度浸泡相同的时间，过滤，得非转基因水稻水浸泡液；即，制备非转基因水稻水浸泡液时的料液比、浸泡温度和浸泡时间完全同制备转基因抗虫水稻水浸泡液时的料液比、浸泡温度和浸泡时间；

2)、草履虫母液的培养；

将普通水稻秸梗按照1g/20～30ml的料液比加入蒸馏水，煮沸至少0.5小时，过滤，得普通水稻水浸煮沸液；

将大草履虫放入普通水稻水浸煮沸液中进行常规培养(即，培养温度为25～27℃)，得草履虫培养母液；草履虫培养母液中草履虫的密度为(0.8～1.2)×10³ind/mL；

3)、用转基因抗虫水稻水浸泡液和非转基因水稻水浸泡液分别培养草履虫：

将草履虫培养母液按照1∶90～110的体积比加入至转基因抗虫水稻水浸泡液中作为转基因培养液(即，草履虫培养母液与转基因抗虫水稻水浸泡液的体积比为1∶90～110)，于25～27℃恒温培养6～8天；

将草履虫培养母液按照上述相同的体积比加入至非转基因水稻水浸泡液中作为非转基因培养液，于上述相同的温度培养相同的时间；即，制备非转基因培养液时的体积比、培养温度和培养时间完全同制备转基因培养液时的体积比、培养温度和培养时间；