[发明专利]利用纤突展示狂犬病病毒保护性抗原的犬II型腺病毒活载体重组疫苗

权利要求书

1.一种利用纤突展示狂犬病病毒保护性抗原的犬II型腺病毒活载体重组疫苗，其特征在于：以犬II型腺病毒为载体，在其结构蛋白基因的疏水性位点插入狂犬病病毒保护性抗原基因或表达抗原表位的核苷酸序列，使外源抗原或表位在腺病毒表面与其结构蛋白融合表达，所述的疏水性位点位于犬II型腺病毒结构蛋白纤突。

2.根据权利要求1所述的重组疫苗，其特征在于：在犬II型腺病毒全基因组28106bp处引入一段人工合成的核酸序列，人工合成的核酸序列含Xma I酶切位点，在Xma I酶切位点处，按纤突的转录阅读框插入狂犬病病毒糖蛋白中和抗原表位，使其与纤突在腺病毒颗粒外表面融合表达。

3.根据权利要求2所述的重组疫苗，其特征在于：利用pBluescriptII KS(+/-)中的酶切位点Sac I和Kpn I，插入人工合成序列Linker SK，依次含Sal I、Xma I、Spe I和Pac I多个酶切位点，获得重组质粒pBS-SKI，按纤突基因序列，人工合成犬II型腺病毒全基因组序列28050bp～28106bp区段，并插入Linker SK中Sal I～Xma I之间，利用PCR获得犬II型腺病毒全基因组中30182bp～29358bp序列，将两片段插入Linker SK中Spe I～Pac I之间，获得重组质粒pBS-SKII，再将狂犬病病毒中和抗原表位按纤突基因的转录阅读框插入pBS-SKII的Linker SK中Xma I和Spe I位点之间，获得改造后的纤突基因，最后，通过Linker SK中两端的酶切位点Sal I和Pac I，将改造的纤突基因插入pPOLYII-CAV2中，得到重组犬II型腺病毒全基因组。

4.根据权利要求1所述的重组疫苗，其特征在于：所述的狂犬病病毒保护性抗原基因为狂犬病病毒糖蛋白膜外区序列为：

GGCCCAAATTCCCTATTTACACGATACCAGACACACTTGGTCCCTGGAGACCGATCGATATACATCATCTCAGTTGCCCAAACAATTTGGTTGTGGAGGATGAAGGATGCACCAACCTGTCAGGGTTCTCCTACATGGAACTTAAAGTTGGACACATCTCAGCCATAAAGGTGAACGGGTTCACTTGCACAGGCGTTGTGACAGAGGCAGAAACGTACACTAACTTTGTTGGTTATGTCACCACCACGTTCAAAAGAAAGCATTTCCGCCCAACACCAGATGCATGTAGAGCCGCGTACAACTGGAAGATGGCCGGTGACCCCAGATATGAAGAGTCTCTACACAGTCCGTACCCTGACTACCATTGGCTTCGAACCGTAAAAACCACAAAGGAGTCTATCGTTATCATATCTCCAAGTGTGGCAAATTTGGACCCATATGATAACTCCCTTCACTTGAGGGTCTTCCCTAGCGGAAAGTGCTCAGGAATAACGGTGCCTTCTGTCTACTGCTCAACTAACCACGATTACACCGTTTGGATGCCTGAAATCCTGAGACTAGGGACATCTTGTGATATTTTTACTAATAGTAGAGGGAAGAGAGCATCCAAGGGGAGCAAGACCTGTGGCTTTGTAGATGAAAGGGGCCTATATAAGTCTCTAAAAGGCGCATGCAAACTCAAGTTATGTGGAGTTCCTGGACTTAGACTTATGGACGGAACATGGGTCTCGATGCAGACATCAAATGAGACCAAATGGTGTCCTCCCGGTCAGTTGGTTAATCTGCACGACCTTCACTCAGACGAAATTGAGCATCTTGTTGTAGAGGAGTTGGTCAAGAAAAGAGAGGAGTGTCTGGATGCACTAGAGTCCATCATAACCACCAAGTCAGTGAGTTTCAGACGTCTCAGTCATTTAAGAAAACTTGTCCCCGGGTTCGGAAAGGCATATACCATATTCAACAAGACCTTGATGGAGGCTGAAGCTCACTACAAGTCAGTCAGGACTTGGAATGAGATCATCCCCTCAAAAGGGTGTTTGAGAGTTGGAGGGCATGTTTTAATCCCAGAGATGCAATCATCCCTCCTCCAGCAACATATAGAGTTATTGGAATCCTCAGTTATTCCCCTGATGCACCCCCTTGCAGACCCGTTCACAGTTTTCAAGGACGGCGATGAGATTGAGGATTTTGTGGAAGTTCACCTTCCCGATGTGCACGAACAGGTCTCAGGGGTTGACCTGGGTCTCCCGAACTGGGGGAAG。

5.根据权利要求1所述的重组疫苗，其特征在于：所述的表达抗原表位的核苷酸序列为：

TGAACCTAGTATGTCAATAGGGCTCCAGGATCCGAG或CCCGGGTGGAGCCCGATCGATATAGGCGCCTCTCTAAAAGGCGCATGCAAACTCAAGTTATGTGGAGTTCTTGGACTTAGACTTATGGACGGAACATGGGGGCCCAGTAATGAGACCAAATGGTGTCCTCCCGATCAGTTGGTTAATCTGCACGACTTTCGCTCAGACGAAATTGAGCATCTTGTTGTAGAGGAGGCTAGC。