[发明专利]一种氨苄青霉素抗性质粒载体及其制备与应用

权利要求书

1.一种氨苄青霉素抗性质粒载体，所述氨苄青霉素抗性质粒载体的质粒骨架上含有抗氨苄青霉素基因，所述抗氨苄青霉素基因为β-内酰胺酶的编码基因与β-半乳糖苷酶α肽编码基因的融合基因。

2.如权利要求1所述氨苄青霉素抗性质粒载体，其特征在于，所述融合基因中，β-半乳糖苷酶α肽编码基因连接于β-内酰胺酶编码基因的3’端。

3.如权利要求1所述氨苄青霉素抗性质粒载体，其特征在于，所述融合基因中，β-半乳糖苷酶α肽编码基因与β-内酰胺酶编码基因直接相连，或者两者之间经连接肽编码基因连接。

4.如权利要求1所述氨苄青霉素抗性质粒载体，其特征在于，所述融合基因编码序列为：SEQ ID NO：14的融合蛋白，或者所述融合基因编码的蛋白质其氨基酸序列与SEQ ID NO：14具有高度同源性。

5.如权利要求1所述氨苄青霉素抗性质粒载体，其特征在于，所述融合基因的序列为：SEQ ID NO：1，或者所述融合基因的序列与SEQ ID NO：1具有高度同源性。

6.权利要求1-5任一所述氨苄青霉素抗性质粒载体的制备方法，为将现有氨苄青霉素抗性质粒载体中的β-内酰胺酶编码基因采用β-内酰胺酶的编码基因与β-半乳糖苷酶α肽编码基因的融合基因替换的方法获得。

7.权利要求1-5任一所述氨苄青霉素抗性质粒载体用于构建重组载体的用途。

8.一种减少携带有氨苄青霉素抗性重组载体的菌株在培养过程中β-内酰胺酶泄漏的方法，选自以下任一：

1)采用权利要求1-5任一所述氨苄青霉素抗性质粒载体构建重组载体，而后转化并用于培养；

2)将所述菌株携带的氨苄青霉素抗性重组载体进行基因改造，将该氨苄青霉素抗性重组载体质粒骨架中的β-内酰胺酶编码基因改造为β-内酰胺酶的编码基因与β-半乳糖苷酶α肽编码基因的融合基因，而后转化并用于培养。

9.如权利要求8所述方法，其特征在于，所述菌株为大肠杆菌菌株，菌株可以是但不限于：BL21，BL21(DE3)，BL21(DE3)plysS，DH5α，DH10B，JM109，Mach1T1，Origami，Origami(DE3)，Origami(DE3)pLysS，Origami B，Origami B(DE3)，Origami B(DE3)pLysS，Rosetta，Rosetta(DE3)，Rosetta(DE3)pLysS，TG1，TOP10或XL1-Blue。