[发明专利]抗ERCC1单克隆抗体2E12及其用途

说明书

技术领域

本发明涉及可特异性结合切除修复交叉互补基因1(excision repair cross-complement-action group 1，ERCC1)蛋白的单克隆抗体，产生所述单克隆抗体的杂交瘤，包含所述单克隆抗体的组合物，以及所述单克隆抗体的使用方法和用途。

背景技术

恶性肿瘤是严重威胁人类健康的疾病之一，铂类药物参与的化疗是其重要的治疗手段。以顺铂为代表的铂类药物是20世纪60年代开发的高效广谱的无机抗肿瘤药，属于破坏DNA结构和功能的细胞毒药物，经过长期研究发展，已相继成功开发了顺铂(cisp1atin)、卡铂(Carboplatin)、奈达铂(Nedaplatin)、奥沙利铂(Oxaliplatin)、舒铂(Sunpla)和洛铂(Lobaplatin)，常与其他抗肿瘤药物联合使用，用于卵巢癌、肺癌、胃癌、宫颈癌、头颈部癌、恶性淋巴瘤等多种癌症的临床治疗。但肿瘤对铂类药物的耐药性严重影响了其治疗的疗效，耐药的原因很多，其中DNA损伤修复能力增强是导致铂类耐药的主要原因。

人体DNA受各种因素损伤后，其修复主要是通过核苷酸切除修复(Nueleotide excision repair，NER)途径来完成。其中起到重要作用的核苷酸ERCC基因家族能对核苷酸进行切除和修复以减少DNA的损伤。其中，切除修复交叉互补基因1(excision repair cross-complement-action group 1，ERCC1)参与DNA链的损伤识别和切割，在NER过程中起着至关重要的作用，是ERCC基因家族和NER途径的关键基因。有研究显示，ERCC1过表达可使损伤DNA迅速修复，导致顺铂耐药，NER过程增强是导致顺铂耐药的一个重要机制。

2010年NCCN指南指出，ERCC1可以作为非小细胞肺癌(NSCLC)的预后判断和疗效预测标记物。一方面，与ERCC1低水平相比，ERCC1高水平预示NSCLC患者生存效果更佳(与治疗无关)，同时ERCC1高水平预示含铂类药物化疗效果不佳。研究显示，在完全切除的、未接受过围手术期化疗或放疗的NSCLC患者中，ERCC1mRNA水平是生存预后指标，研究显示，高表达的患者生存期显著长于低表达者。另一方面，已有多项转化型研究证明，ERCC1水平可用于预测含铂化疗治疗NSCLC的疗效，高水平者耐药，低水平者敏感。Olaussen等发现，在国际癌辅助化疗研究(IALT)中，仅肿瘤ERCC1蛋白低表达者可从含顺铂辅助化疗中获益。Bepler等报道，前瞻性采集自一项基于社区的III期随机临床研究的肿瘤标本中，其原位ERCC1蛋白表达水平与卡铂/吉西他滨或吉西他滨单药治疗后疾病缓解成显著负相关，即ERCC1低表达者缓解率更高。

因此目前临床上在进行肿瘤辅助化疗之前，通常通过免疫组织化学(IHC)病理实验确定肿瘤细胞中ERCC1的表达水平，进而起到指导含铂类化疗药物使用的目的。IHC实验的核心为特异性结合ERCC1的单克隆抗体，当前国内外广泛用于临床病理一线的ERCC1单抗为8F1，但研究显示，8F1在与ERCC1特异结合的同时，还与非特异蛋白发生交叉反应，直接影响了免疫组化结果的特异性。

因此，本领域迫切需要这样的单克隆抗体，其不仅可与ERCC1特异性结合，而且与细胞内的其他非特异蛋白不发生交叉反应，以显著提高IHC实验的特异性和可靠性，从而更有效和更精确地用于非小细胞肺癌、卵巢癌等肿瘤的预后判断，实现对使用铂类化疗药物的辅助化疗进行疗效预测。

发明内容

在本发明中，除非另有说明，否则本文中使用的科学和技术名词具有本领域技术人员所通常理解的含义。并且，本文中所用的蛋白质和核酸化学、分子生物学、细胞和组织培养、微生物学、免疫学相关术语和实验室操作步骤均为相应领域内广泛使用的术语和常规步骤。同时，为了更好地理解本发明，下面提供相关术语的定义和解释。

如本文中所使用的，术语“切除修复交叉互补基因1(ERCC1)”是本领域内熟知的，其是ERCC基因家族和NER途径的关键基因，参与DNA链的损伤识别和切割，在NER途径中起着至关重要的作用。ERCC1蛋白是核苷酸剪切修复复合体的5’核酸内切酶，见于所有的肿瘤细胞中，其表达水平差异很大。ERCC1蛋白的示例性编码核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。