[发明专利]淡紫拟青霉的液体发酵培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种真菌的液体发酵培养方法，尤其涉及淡紫拟青霉(P.lilacinus)的液体发酵培养方法，属于淡紫拟青霉的液体发酵培养领域。

背景技术

淡紫拟青霉(P.lilacinus)属半知菌纲、丝孢菌目、丝孢菌科、拟青霉属，广泛分布于世界各地，具有功效高、寄主广、易培养等优点。淡紫拟青霉是目前防治植物寄生线虫的主要天敌真菌之一，极具研究和开发价值。淡紫拟青霉是南方根结线虫与白色胞囊线虫卵的有效寄生菌，对南方根结线虫的卵寄生率高达60％-70％。对多种线虫都有防治效能，其寄主有根结线虫、胞囊线虫、金色线虫、异皮线虫、甚至人畜肠道蛔虫，是防治根结线虫的生防制剂。淡紫拟青霉也能分泌毒素对线虫起毒杀作用。此外，还有部分淡紫拟青霉对植物病原菌具有拮抗效能。

在淡紫拟青霉的培养过程中，尤其是在液体深层发酵过程中，淡紫拟青霉能分泌大量的对线虫起杀毒作用的毒素(CAYREL JC.et al.Study of the nematocidal properties of the culture filtrate of thenematophagous fungus Paecliomyces lilacimus(J).RevudedNematologie.1989.12：331-336)。

现有的淡紫拟青霉的发酵培养和发酵工艺的研究还很不成熟，存在着许多急需解决的问题，例如，随着培养基的组成、碳源、氮源、C/N和湿度、光照、温度等因子的改变而诱发的菌株变异问题，导致菌丝生长速度加快但产孢量下降，其生防效果也随之下降。采取合理的发酵培养基质和发酵工艺，不但可以有效解决菌株变异问题，对于提高孢子产率进而实现规模化生产也十分重要。因此，为了提高液体发酵中淡紫拟青霉的孢子产量，需要对发酵培养基的组成及液体发酵条件等工艺参数进行优化和筛选以最大限度的提高淡紫拟青霉的孢子产量。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，以产孢量为考核指标，对淡紫拟青霉的液体发酵培养过程中的C、N源营养需求，培养温度，pH值条件，溶氧状况等条件进行优化或考察，获得液体发酵培养基的最佳组成或最适宜的发酵条件，有效提高淡紫拟青霉的孢子产量、降低生产成本低，为大规模杀线菌剂的研制和规模化生产提供技术支撑。

本发明所要解决的技术问题是通过以下技术方案来实现的：

一种淡紫拟青霉的液体发酵培养方法，包括：制备淡紫拟青霉孢子悬浮液；制备淡紫拟青霉的液体发酵培养基；向液体发酵培养基中接种淡紫拟青霉孢子悬浮液，发酵培养，即得；其中，所述的液体发酵培养基的组成成分包括碳源和氮源；所述的碳源包括但不限于葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、可溶性淀粉或玉米粉中的任一种或多种，优选为葡萄糖、可溶性淀粉或玉米粉，更优选为葡萄糖；其中，所述碳源的用量优选为40.0g/L。

所述的氮源包括但不限于硝酸钠、硫酸铵、蛋白胨或黄豆粉中的任一种或多种；优选为硝酸钠、硫酸铵或黄豆粉中的一种或多种；更优选的，所述氮源由硝酸钠、硫酸铵和黄豆粉组成；所述氮源的用量优选为10.0-20.0g/L；其中，NaNO₃的用量优选为5.0-10.0g/L，进一步优选为5.0-6.0g/L，更优选为5.0g/L；(NH₄)₂SO₄的用量优选为2.5-5.0g/L，进一步优选为2.5-2.8g/L，更优选为2.5g/L；黄豆粉的用量优选为2.5-5.0g/L，进一步优选为2.5-2.8g/L，更优选为2.5g/L。

为了达到更好的技术效果，所述液体发酵培养基中还可含有无机盐；其中，所述的无机盐包括但不限于磷酸二氢钾或七水硫酸镁；所述无机盐的用量优选为0.5-1.5g/L，更优选为1.5g/L。

本发明通过大量的实验发现，液体发酵培养基的初始pH值对于淡紫拟青霉的孢子产量有着非常显著的影响，当液体发酵培养基的初始pH值为3-9时均能产孢；本发明通过进一步的实验发现，液体发酵培养基的初始pH值在5.0-7.0，尤其当初始pH值为5.0-5.5时，淡紫拟青霉的孢子产量相对较高；当液体发酵培养基的初始pH值是5.0时，淡紫拟青霉的产孢量达到最高，相比于其它pH值的产孢量有显著性差异。