[发明专利]一种HCV核酸适配体及其在制备HCV-cAg检测试剂盒中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种肝炎病毒核酸适配体及其应用，尤其涉及一种丙型肝炎病毒核心抗原(HCV-cAg)核酸适配体及其在制备丙型肝炎病毒核心抗原(HCV-cAg)检测试剂盒中的应用。 

背景技术

丙型肝炎是由丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus，HCV)感染引起的，已成为全球性严重的卫生问题和健康难题。HCV为嗜肝性慢性病毒，经HCV感染后的患者临床症状极不典型，容易造成漏诊。与乙肝相比，丙肝更易发生慢性化，且易早期出现肝硬化、肝癌，死亡率较高，因此HCV的检测对丙型肝炎病毒感染的早期诊断和指导临床治疗有重大的意义。 

目前用于HCV感染诊断的两项主要指标为抗-HCV检测和HCV RNA检测，抗-HCV检测存在大约70d的“窗口期”(即从病毒感染起至可以检测出该病毒标准物之前的时期)，这一时期具有很强的感染性，在此时期进行输血、注射等都极有可能造成HCV感染，从而引起疾病的传播，此外该方法也不能用于丙肝患者的疗效监测；而HCVRNA在晚期肝病患者中含量很少，往往检测不到，且该方法技术和环境要求较高，其应用受到很大的限制。2001年Ortho公司推出了检测HCV核心抗原ELISA试剂盒，2005年湖南景达制药有限公司推出了HCV游离核心抗原检测试剂盒，该试剂盒操作简易，对人员、仪器的要求较为简单，但是一旦体内产生了抗体，血清中的抗原、抗体便形成了抗原-抗体复合物，其检测的灵敏度便会大大降低。鉴于此，开发一种快速、操作简单易用、检测灵敏度高的方法在临床诊断中具有十分重要的意义。 

近年来，核酸适配体(aptamer)技术有了进一步的发展。核酸适配体是指通过指数富集配体系统进化(systematic evolution of ligands by exponential enrichment，SELEX)技术从人工合成的DNA文库中筛选得到的能与相应配体专一性紧密结合的一类单链寡核苷酸序列。它分子量小，这段序列可以是RNA，修饰RNA，ssDNA或dsDNA，它具有与抗体分子相当甚至更强的靶标识别能力，更容易进行修饰和标记，更加稳定，且易与传统的酶联免疫技术相结合。适配体富集作用强，可捕捉到血清中微量的疾病靶标标志物，通过酶标记抗体的信号放大程序，实现了对感染性疾病的快速、灵敏、特异性检测，并且还可完成多指标的联合检测，故在疾病的诊断上有广阔的应用前景。 

发明内容

本发明的目的在于提供一种丙型肝炎病毒核心抗原(HCV-cAg)核酸适配体及其在制备HCV核心抗原检测试剂盒中的应用。 

本发明所述丙型肝炎病毒核心抗原(HCV-cAg)核酸适配体，其特征在于，所述适配体的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示。 

进一步的，上述适配体连接或标记了生物素或荧光素。 

本发明所述丙型肝炎病毒核心抗原(HCV-cAg)核酸适配体在制备HCV核心抗原检 测试剂盒中的应用。 

其中：所述HCV核心抗原检测试剂盒由如下组分构成： 

96人份抗HCV-cAg单克隆抗体酶标板1块，阴性对照1瓶，阳性对照1瓶，样品稀释液1瓶，生物素标记HCV-cAg寡核苷酸适配体(Bio-HCV-cAg aptamer)稀释液1瓶，辣根过氧化物酶标记亲和素(Avi-HRP)稀释液1瓶，洗涤液1瓶，显色剂A1瓶，显色剂B1瓶，终止液1瓶，说明书1份，不干胶封片3片。 

上述酶标板为透明聚苯乙烯96或48孔酶标板，且其各孔包被有浓度为5ug/ml的包被抗体(所述包被抗体包含HCV核心区2～180氨基酸位置)，包被缓冲液为pH4.7～4.9醋酸盐缓冲液稀释；生物素标记HCV-cAg寡核苷酸适配体(Bio-HCV-cAg aptamer)稀释液为标记上了生物素的丙型肝炎病毒核心抗原寡核苷酸序列的溶液；辣根过氧化物酶标记亲和素(Avi-HRP)稀释液为做了相适稀释的辣根过氧化物酶标记的亲和素(Avi-HRP)；显色体系为3，3，5，5-四甲基联苯胺(TMB)体系。 

本发明的丙型肝炎病毒核心抗原(HCV-cAg)核酸适配体可以捕获溶液中的丙型肝炎病毒核心蛋白，也可以检测溶液中丙型肝炎病毒的核心蛋白，利用其制备的HCV核心抗原检测试剂盒可以克服现有的检测方法的缺陷，提高检测的灵敏度，且操作简便、特异性强，周期短，极有利于丙型肝炎血清学诊断和血液筛查。 

综上，与现有技术相比，本发明的核酸适配体及利用其制备的HCV核心抗原检测试剂盒还具有以下突出优点：