[发明专利]一种碘普罗胺高效降解菌的提取方法

说明书

技术领域

本发明属于含氮的芳香杂环化合物的降解菌的提取领域，特别涉及一种碘普罗胺高效降解菌的提取方法。

背景技术

近年来，医药品与个人护理品(pharmaceuticals andpersonal care products，PPCPs)成为了受到国内外广泛关注的新型痕量污染物。尽管这类物质在环境中的浓度很低，其中有些药品在环境中通常以ng/L～μg/L水平存在，但是考虑到污染物在环境中的累积效应，因此不能排除其对环境的不利影响。

在常见的PPCPs化合物中，抗生素、消炎药、抗癫痫药物、碘化造影剂在各类环境介质中均有检出。碘普罗胺(分子结构如图1所示)，是用于血管造影、肾动脉造影、尿路造影、CT的对比增强检查、体腔显示(关节腔造影，子宫输卵管造影，娄道造影)的一种碘化造影剂(iodinated contrast media compounds，ICM)。随着现代放射诊断技术和介入治疗技术的发展，ICM市场需求日益增加，其全球年销量达到3.5×10³吨，在中国，碘普罗胺的销量在ICM中居第二位。ICM的使用剂量较高，每个成人每日ICM的消费剂量可高达200g，且其具有极强的生化稳定性，人体注射后，大部分不经新陈代谢而直接排出体外，大量ICM进入城市污水处理厂。然而碘普罗胺是含氮的芳香杂环化合物，城市污水处理厂的常规工艺对其几乎没有去除效果，从而使其随污水处理厂出水进入地表径流，地下水，甚至饮用水中。欧洲一些国家如德国已经在各种水体环境中频繁检测到碘普罗胺，有时浓度高达10μg/L，对饮水安全造成了潜在的危害。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种碘普罗胺高效降解菌(Pseudomonas sp)I-24的提取方法，该提取方法中种源易得，且分离纯化方法简便快捷；该细菌在共代谢条件下可以有效地降解碘普罗胺，易于灭活，保证了使用的生态安全性。

本发明的一种碘普罗胺高效降解菌(Pseudomonas sp)I-24的提取方法，包括：

将城市污水处理厂二沉池的回流污泥经定向驯化培养，然后将驯化培养后的样品通过富集分离和纯化，即得该碘普罗胺高效降解菌。

所述的定向驯化培养为将活性污泥按5％的接入量接种于无机盐培养基中，以梯度压力式驯化法驯化；其中碘普罗胺浓度为10mg/L、50mg/L、80mg/L、100mg/L、130mg/L、150mg/L，150mL锥形瓶中装填量100mL，在30℃、160r/min的摇床中避光振荡培养，总驯化时间为2个月。

所述的无机盐培养基为NH₄Cl 2.1g，K₂HPO₄ 4.35g，KH₂PO₄ 1.7g，MgSO₄ 0.2g，CaCl₂·2H₂O 0.03g，MnSO₄ 0.05g，FeSO₄·7H₂O 0.01g，蒸馏水1000mL，pH＝6.8～7.0。

所述的富集分离和纯化为将驯化培养后的样品静置30分钟，取上层水样1mL，作10^-1～10^-10梯度稀释，然后将每种稀释浓度分别取1mL菌液涂布于固体培养基中，并将其倒置于30℃培养箱中培养48h；挑取形态清晰的单一菌落，编号，在固体培养基上划线，将培养皿倒置于30℃培养箱中培养48h，再观察结果；反复几次，并在电子显微镜下观察，确保是纯的单一菌株后，将分离出的菌种接种到斜面培养基上，4℃下保存于冰箱中。

上述的富集培养基为牛肉膏3.0g，蛋白胨10.0g，NaCl 5.0g，琼脂粉18g，蒸馏水1000mL，pH＝7.0～7.2。

经16S rDNA序列测定及在NCBI数据库中进行同源性比较，得到与本发明的碘普罗胺高效降解菌最相近的种属是假单胞菌属(Pseudomonas)，同源性达到99％。结合细菌形态特征、生理生化鉴定结果确定该碘普罗胺高效降解菌为假单胞菌属，其16S rDNA序列在GenBank中的登录号为JN226399，命名为(Pseudomonas sp)I-24。

该碘普罗胺高效降解菌(Pseudomonas sp)I-24经16S rDNA序列测定，基因全序列如下：

TGCTCCCCGATTCAGCGGCGGACGGGTGAGTAATGCCTAGGAATCTGCCTGGTAGTG