[发明专利]包含脑膜炎奈瑟氏球菌表面抗原NhhA的保守区域的蛋白质

说明书

本申请是申请号为01807183.X，申请日为2001年1月25日，发明名称为“包含脑膜炎奈瑟氏球菌表面抗原NhhA的保守区域的蛋白质”的中国专利申请的分案申请。

发明领域

本发明涉及组成修饰形式的脑膜炎奈瑟氏球菌表面抗原的新蛋白质，涉及编码这种新肽和多肽的核酸，及涉及这些物质在诊断性，治疗性和预防性疫苗中的应用，及设计和/或筛选药物中的应用。更特别地，通过缺失非保守的氨基酸，本发明的修饰的表面抗原在疫苗中比相应的野生型表面抗原在对抗更广谱脑膜炎奈瑟氏球菌菌株中更加有效。

发明背景

脑膜炎奈瑟氏球菌是一种革兰氏阴性菌，是导致脑膜炎奈瑟氏球菌性脑膜炎和败血病的主要因素。其唯一已知的宿主是人，而且大约10％的人可以是无症状携带者(Caugant等，1994，临床微生物学杂志32：323)。

脑膜炎奈瑟氏球菌可以表达一种多糖荚膜，使得可以根据表达的荚膜的性质对此菌进行分类。有至少12种脑膜炎奈瑟氏球菌血清型：A，B，C，29-E，H，I，K，L，W135，X，Y和Z，其中血清型A，B，和C导致90％的脑膜炎奈瑟氏球菌性疾病(Poolman等，1995，感染性因素和疾病4：13)。可以获得直接抗血清型A和C的疫苗，但血清型B荚膜多糖在人体内免疫原性很低，不能诱导保护作用。

因此对其它膜和胞外成分是否适于包含于疫苗中进行测试。例如测试1，2和3型(膜孔蛋白；由por基因编码)，和4型(Rmp)和5型(不透明性蛋白；由opa和opc基因编码)的外膜蛋白。

然而，目前这些候选物中无一能诱导完全的防护作用，尤其在儿童中(Romero等，1994，临床微生物学回顾，7559；Poolman等，1995，如前)。

为产生一种有效的疫苗，必需鉴别出在多数菌株中存在的而且能诱导防护性免疫应答的脑膜炎奈瑟氏球菌的成分(例如细菌抗体)。

在这方面，参考国际出版物WO99/24578，WO99/36544和WO99/57280，所述文献均在此并入参考，并阐述了一些可用于疫苗中以抗脑膜炎奈瑟氏球菌免疫的候选蛋白。

在这方面，特别参考国际出版物WO99/31132和Peak等，2000，FEMS免疫学医学微生物学28329，所述文献在此均并入参考，并阐述了一种分离自一些不同脑膜炎奈瑟氏球菌菌株的新表面抗原，这些表面抗原及其等位基因变体在本说明书中称为NhhA。

发明概述

本发明人揭示了NhhA表面抗原具有在脑膜炎奈瑟氏球菌菌株之间可以变化的多肽区域，和其它在菌株之间是保守的区域。可变区域可以是免疫原性的，并趋于激发菌株特异性免疫应答，这样包含衍生自特定脑膜炎奈瑟氏球菌菌株的NhhA抗原的疫苗趋于优先对特定菌株有免疫作用。因此，本发明人探求产生一种修饰的NhhA多肽，其激发一种与由野生型NhhA激发的菌株特异性免疫应答不同的免疫应答。这种修饰的NhhA抗原用于产生抗脑膜炎奈瑟氏球菌的治疗性和/或预防性疫苗，如下文所述。通过主要指导抗保守表位的免疫应答，这种疫苗对广谱脑膜炎奈瑟氏球菌的免疫作用应比野生型NhhA的免疫作用更有效。

本发明因此主要涉及分离具有NhhA多肽保守氨基酸的蛋白质。

因此本发明的蛋白质与相应野生型NhhA多肽相比，可以缺失一或多个非保守的氨基酸。

本发明的第一方面提供了一种分离的蛋白质，其包含NhhA多肽的12个或更多个连续的保守氨基酸的序列，所述分离的蛋白质不包括野生型NhhA多肽。

适当地，本发明的蛋白质能激发一种免疫应答。

优选地，这种免疫应答比所述相应野生型NhhA多肽激发的免疫应答的菌株特异性低。

更优选地，所述免疫应答提供了抗一或多个脑膜炎奈瑟氏球菌菌株的防护作用，或者甚至更优选地抗大多数脑膜炎奈瑟氏球菌菌株的防护作用。

野生型NhhA多肽序列示于图1(SEQ ID NO：1-10)。

共有氨基酸序列也示于图1(SEQ ID NO：11)。

本发明分离的蛋白质优选包含NhhA多肽的一或多个保守区，在图1中称为C1，C2，C3，C4和C5区。

应意识到根据本发明的这方面，与野生型NhhA多肽相比，NhhA多肽的一个可变区可缺失一或多个非保守氨基酸，所述可变区在图1中称为V1，V2，V3或V4区。

优选地，V1区或至少其大部分是缺失的。