[发明专利]肠杆菌SYA2及用其制备乳糖酶的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，具体的说是一种肠杆菌及用其制备乳糖酶的方法。

背景技术

乳糖酶（Lactase）学名为β-D-半乳糖苷半乳糖水解酶（β-D-galactoside galactohydrolase，E.C.3.2.1.23)，又名β-半乳糖苷酶(β-galactosidase)，是一类催化β-D-半乳糖苷键发生水解的酶，它能将乳糖水解成半乳糖和葡萄糖。乳糖酶在动物、植物和微生物中分布广泛。

目前为止，研究发现能够产生乳糖酶的微生物有很多，常见的霉菌包括黑曲霉(Aspergillus niger)、米曲霉（Aspergillus oryzae）、亮白曲霉（Aspergillus candidus）、微小毛霉（Mucor pusillus）等；酵母菌包括脆壁克鲁维酵母（Kluyveromyces fragilis）、乳酸克鲁维酵母（Kluyveromyces lactis）、热带假丝酵母（Candida tropicalis）等；细菌包括大肠杆菌（Escherichia Coli）、成团肠杆菌（Enterobacter agglomerans）、巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、环状芽孢杆菌（Bacillus Circulans）、嗜热脂肪芽孢杆菌（Bacillus stearothermophilus）、保加利亚乳杆菌（Lactobacillus bulgaricus）、双歧杆菌（Bifidobacterium）、水生拉恩氏菌（Rahnella aquatilis）、嗜热链球菌（Streptococcus thermophilus）、节杆菌（Arthrobacter aurescens）、黄杆菌（Flavobacterium）等。不同微生物来源的乳糖酶性质及用途不同：霉菌作用最适pH偏酸性(pH2.5～5.0)，主要用于酸性乳清和干酪的水解；酵母所产乳糖酶最适pH近中性(pH6.0～7.0)，适合于牛乳和乳清的加工处理；细菌所产的酶与酵母最适pH接近且具有较高的耐热性。

目前国内外细菌乳糖酶的研究尚处在起步阶段。

发明内容

本发明的目的是提供一种肠杆菌SYA2。

本发明的另一个目的是提供一种用肠杆菌制备乳糖酶的方法。

本发明中的肠杆菌SYA2从甘肃省甘南州牧区采集牦牛乳酸奶中筛选得到，分类命名为肠杆菌(Enterobacter sp ) SYA2，于2011年09月13日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC）保藏，保藏号CGMCC No：5251。

本发明肠杆菌SYA2的筛选方法是采集甘肃省甘南州牧区采集牦牛乳酸奶样品，涂布于含X-gal的分离筛选培养基上，观察菌落颜色变蓝的程度进行初步筛选，并比较乳糖酶活性大小而得到。牧区土壤样品经分离筛选培养基培养，选择生长良好、颜色变蓝的程度大的菌落进行摇瓶发酵培养，通过比较乳糖酶活性大小，最终确定菌株。

含X-gal的分离筛选培养基组成：乳糖20 g/L、酵母膏10 g/L、蛋白胨10g/L、X-gal 0.04 g/L、琼脂20 g/L，pH 7.0。

一个标准酶活单位（U）定义为：在37℃每分钟水解释放1μmoL ONP 所需的酶量。取0.5mL稀释后的粗酶液，在37℃下水浴5min，加入已预热至37℃的含5mmol/L ONPG磷酸盐缓冲液（pH6.5）1.5mL，37℃下水浴10min，然后立即加入3.0mL 0.5mol/LNa₂CO₃终止反应，于420nm处测定OD值，测定3次取平均值。

          

式中，X为乳糖酶活力；C为标准曲线上对应的ONP浓度；N为酶液的稀释倍数。

本发明肠杆菌SYA2 CGMCC No：5251，具有产乳糖酶的能力。

本发明用肠杆菌SYA2制备乳糖酶的方法为如下步骤：

A、种子液制备

将肠杆菌SYA2接种于种子培养基中，在温度37 ℃下，转速150 r/min 摇床培养24小时，得到种子液；