[发明专利]一种磺胺类药物的化学发光酶联免疫检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测磺胺类的化学发光免疫检测试剂盒，用于检测动物组织(肌肉、肝脏)、水产品(鱼、虾)、鸡蛋、牛奶和奶粉中的磺胺类药物含量或残留量。属于免疫学检测领域。

背景技术

磺胺类药物的基本结构为对氨基苯磺酰胺，具有芳氨基和磺酞胺基，多为两性化合物，药物具有一定酸性。磺胺类药物的抑菌作用是由于磺胺类药物中能分解出对氨基苯磺酰胺，其分子的大小和形状与组成叶酸中的对氨基苯甲酸相近，化学性质也类似。由于细菌对二者缺乏选择性，大量的对氨基苯磺胺替代了对氨基苯甲酸而被细菌吸收，干扰细菌叶酸的合成而影响其生长繁殖，从而可抑制大多数革兰氏阳性菌和某些阴性菌。磺胺类药物应用较广，具有一定疗效的就有几十种。

磺胺类药物作为兽药和饲料添加剂，在食源性动物的饲养中被广泛应用，在动物疾病的防治方面具有显著的疗效。例：针对动物的肠炎、乳房炎、肺炎、脑膜炎等疾病。同时，这类药物具有显著的毒副作用，影响人的泌尿系统功能，引起结晶尿，血尿，尿痛，尿少等症状，或产生一些皮炎、发热等过敏反应以及致癌性作用。如果这类药物不按规定或要求使用与停药，动物体内的药物残留会随着食物链影响人体的健康。因此，国内外对磺胺类药物残留均有限量要求，我国以及美国、欧盟等国家规定动物性食品中总磺胺以及单个磺胺的最高残留限量(MRLs)为0.1mg/kg，其中磺胺二甲基嘧啶(SM₂)的MRLs为0.025mg/kg。

目前，针对磺胺类兽药残留的检测方法有薄层色谱法(TLC)、高压液相色谱(HPLC)法、液质联用(HPLC/MS)、气相色谱法(GC)、酶联免疫吸附法(ELISA)和毛细管电泳法(HPCE)等。由于复杂的仪器设备和繁琐的前处理过程，仪器分析方法不适合现场监控和大量样本的筛选，其中ELISA方法作为一种新型的动物源性食品中磺胺类药物残留筛选方法已被使用，但是大部分只能针对磺胺类其中一种或者少数几种药物进行检测，不利于磺胺类药物的全面检测。

化学发光免疫检测方法具有特异性强、稳定快速、检测范围宽、操作简单自动化程度高、试剂稳定且有效期长(6～18个月)等优点，其检测限比酶联免疫法和理化检测方法高几个数量级。化学发光进口仪器与试剂性能较好，而国外的技术垄断导致化学发光仪、发光底物液和试剂盒价格居高不下，而且试剂或试剂盒与仪器相匹配，进口试剂常常不能在国产仪器中使用，造成化学发光免疫方法无法在基层普及。化学发光底物液是化学发光酶免疫检测方法的关键试剂，配制出低成本且性能良好，适合国产仪器使用的的发光底物液，可降低化学发光方法的使用成本，有利于在基层的普及。建立稳定的磺胺类药物多残留化学发光酶免疫检测分析方法，也是进行商品化学发光试剂盒的研制的基础。

发明内容

本发明的目的是提供一种磺胺类的化学发光酶联免疫检测试剂盒。该试剂盒具有检测灵敏度高、应用灵活、方便的特点。

一种磺胺类药物的化学发光酶联免疫检测试剂盒，包括盒体，设在盒体内的酶标板和设在盒体内的试剂；其特征在于，所述酶标板的各孔包被有以磺胺类药物母核与卵清蛋白偶联制成的包被抗原；所述试剂包括：磺胺类单克隆抗体、辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠抗体、磺胺类系列标准溶液、浓缩磷酸盐缓冲液、浓缩洗涤液、化学发光液。

所述酶标板优选乳白色不透明聚苯乙烯96孔化学发光酶标板。

所述酶标板的各孔包被有以磺胺类药物母核与卵清蛋白偶联制成的包被抗原；其中所述包被抗原浓度优选10μg/mL。

所述磺胺类系列标准溶液从磺胺类纯品中稀释得到，稀释液为含有10％甲醇的0.05mmol/L，pH＝7.4的PBS，磺胺类标准品浓度分别是0ng/mL，1.0ng/mL，3.0ng/mL，9.0ng/mL，27.0ng/mL和81.0ng/mL，所述百分比为体积百分比。

所述磺胺类单克隆抗体是由磺胺类药物母核与牛血清蛋白偶合制成的人工免疫原免疫动物制得的单克隆抗体，其工作浓度优选为1∶64000。

所述化学发光液A液为鲁米诺含量为0.01M、对甲苯酚含量为0.001M pH＝8.8的三(羟甲基)氨基甲烷溶液；B液为100mL溶液含柠檬酸2.1g，无水Na₂HPO₄2.82g，0.75％的过氧化氢脲0.64mL的溶液。所述鲁米诺为化学发光底物，对甲苯酚为发光增强剂。