[发明专利]双特异性单克隆抗体及其制备方法与用途

说明书

技术领域

本发明涉及一种双特异性单克隆抗体及其制备方法与用途，具体涉及抗克仑特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺三种β-激动剂双特异性抗体及其制备方法与用途。

技术背景

克仑特罗(Clenbuterol，CL)、沙丁胺醇(Salbutamol，Sal)和莱克多巴胺(Ractopamine，RCT)都属于β-激动剂，能加快畜禽生长速度、减少脂肪沉淀提高瘦肉率，因此被一些畜牧养殖企业作为养殖促进剂非法使用。当人们食用了具有上述药品残留的动物源食品后，会出现以下中毒症状：肌肉震颤、心动过速、心律失常、腹痛、肌肉疼痛、恶心和晕眩等。欧盟、日本等国已经禁止使用，我国在《禁止在饲料和动物饮用水中使用的药物品种目录》中也有明文规定。

目前，主要采用理化检测方法，如高效液相色谱法(HPLC)、液相色谱-质谱法(LC-MS)、气相色谱-质谱法(GC-MS)和免疫学检测方法，如酶联免疫法(ELISA)等方法检测食品中克仑特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺三种β-激动剂药物的残留。仪器检测方法，具有检测精密度高，假阳性率低等特点，但是仪器本身价格昂贵，操作比较繁琐，耗时长，对检测人员专业要求较高，检测费用昂贵，难以进行现场大量样本筛查，主要作为确证方法。免疫学检测方法，尤其是酶联免疫法，作为快速检测方法，酶联免疫检测法基于抗原-抗体的特异性反应，反应灵敏度高，特异性好，技术操作简便，便于现场大量样本的快速筛查，目前在我国得到大量推广应用。

目前国内已经有关于用单克隆抗体建立酶联免疫试剂盒检测方法同时检测克仑特罗和沙丁胺醇的报道和用莱克多巴胺单克隆抗体建立酶联免疫试剂盒方法特异性检测莱克多巴胺的报道，克仑特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺三种β-激动剂药物均属于动物源性食品中规定的检测项目，分别检测无疑增加了检测时间，提高检测成本，不利于现场测定。双特异性单克隆抗体(BsAb)是在普通单克隆抗体的基础上发展起来的一种新型抗体，它的两个Fab片段能特异性结合不同的抗原决定簇，在免疫诊断方面有着广泛的应用前景。本发明提供了能够同时检测克仑特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺的双特异性抗体，并用此特异性抗体建立间接竞争酶联免疫检测方法用于克仑特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺及其残留量的测定。

发明内容

本发明针对现有技术检测克仑特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺难度较大，检测成本高的缺点，提供了一种同时抗克仑特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺的双特异性抗体及此双特异性抗体制备方法，该双特异性抗体可用于制备检测克仑特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺的快速检测试剂盒。

一种双特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞，其保藏编号为CGMCC No.5129，保藏日期2011年08年19日，保藏单位是中国微生物菌种保藏管理委员会。

一种双特异性抗体是由杂交瘤细胞CGMCC No.5129分泌的。

一种双特异性抗体的制备方法，将抗克仑特罗、沙丁胺醇的杂交瘤细胞株与抗莱克多巴胺的杂交瘤细胞株分别进行驯化，使其成为HAT敏感株，再进行筛选融合得到同时抗克仑特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺的双特异性抗体杂交瘤细胞，注射老鼠腹腔，采集腹水，得到双特异性单克隆抗体。

有益效果：本发明方法制备的抗克仑特罗、沙丁胺醇和莱克多多巴胺的双特异性单克隆抗体性能较好，经间接ELISA测定，其效价达到350000，其对克仑特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺有较好的特异性反应，并且制备双特异性抗体的制备方法简单，成本较低，用于免疫快速检测试剂盒时，便于推广利用。

具体实施方式

实施例一

抗克仑特罗、沙丁胺醇的单克隆杂交瘤细胞株制备

克仑特罗半抗原的合成