[发明专利]鉴定北京基因型结核分枝杆菌的分子标识和方法无效
| 申请号： | 201110282776.3 | 申请日： | 2011-09-22 |
| 公开（公告）号： | CN103014134A | 公开（公告）日： | 2013-04-03 |
| 发明（设计）人： | 秦莲花;胡忠义;王洁;郑瑞娟;崔振玲;麦广良 | 申请（专利权）人： | 上海市肺科医院 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11 |
| 代理公司： | 上海新天专利代理有限公司 31213 | 代理人： | 王敏杰 |
| 地址： | 200433 *** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 鉴定 北京 基因型 结核 分枝杆菌 分子 标识 方法 | ||
1.一种用于鉴定北京基因型结核分枝杆菌的寡核苷酸序列，其特征在于，所述寡核苷酸序列包括如下CCG简单串联重复序列：
CCGCCGCCGCCGCCTCCGCCGCCGCCGTCG。
2.一种鉴定北京基因型结核分枝杆菌的方法，其特征在于，步骤包括：
步骤1，以含有微卫星CCG位点的Rv0050基因序列为模板，设计一对同源引物；
步骤2，提取待测样品DNA为模板DNA，利用步骤1中设计的一对同源引物进行PCR扩增；
步骤3，将PCR扩增产物克隆测序获得PCR扩增片段的核酸序列，如果扩增片段中有的CCG简单串联重复序列形态是(CCG)4CCT(CCG)4TCG，则判定为北京基因型结核分枝杆菌，如果扩增片段中有的CCG简单串联重复序列形态不是(CCG)4 CCT(CCG)4TCG，则不是北京基因型结核分枝杆菌。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述一对同源引物为：
5'-TTGAAGGGCACGTCGAACGAG-3'；
5'-GGGACCGATCGGGATGGTAA-3'。
4.一种鉴定北京基因型结核分枝杆菌的方法，其特征在于，步骤包括：
步骤1，以含有微卫星CCG位点的Rv0050基因序列为模板，设计一对同源引物；
步骤2，提取待测样品DNA为模板DNA，利用步骤1中设计的一对同源引物进行PCR扩增，
步骤3，将步骤2中得到扩增产物进行电泳、染色，对比所述扩增产物的电泳条带与(CCG)4CCT(CCG)4TCG在相同条件PCR扩增和电泳标准条带，如果扩增产物与标准条带大小相同，则为北京基因型结核分枝杆菌，如果扩增产物与标准条带大小不同，则不是北京基因型结核分枝杆菌。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述染色为硝酸银染色。
6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述电泳为6%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述电泳条件包括：
将PCR扩增产物于94℃变性7分钟，然后经变性聚丙烯酰胺电泳，1500V条件下电泳1.5~2小时。
8.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述一对同源引物为：
5'-TTGAAGGGCACGTCGAACGAG-3'；
5'-GGGACCGATCGGGATGGTAA-3'。
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